miR-328對高糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)控及信號機制.pdf

1、目的：
　　通過高糖誘導構(gòu)建人臍靜脈內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化模型，探討 miR-328在內(nèi)皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的調(diào)控作用以及MEK1/2-ERK1/2信號通路在其中的作用。
　　方法：
　　培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），高糖誘導間質(zhì)轉(zhuǎn)分化；構(gòu)建攜帶miR-328和antagomiR-328基因的重組慢病毒，轉(zhuǎn)染HUVECs。將實驗分為九組：①

2、：HUVECs+正常葡萄糖(5.5mmol/L)，②：HUVECs+甘露醇對照組(30mmol/L)，③：HUVECs+高濃度葡萄糖(30mmol/L)，④：HUVECs+miR-328，⑤：HUVECs+miR-328病毒陰性對照，⑥：HUVECs+高濃度葡萄糖+antagomiR-328，⑦：HUVECs+高濃度葡萄糖+antagomiR-328病毒陰性對照，⑧:HUVECs+高濃度葡萄糖+U0126（10μmol/L），⑨：HUV

3、ECs+miR-328+U0126（10μmol/L）。免疫熒光雙染色鑒定 HUVECs發(fā)生間質(zhì)轉(zhuǎn)分化； RT-PCR檢測miR-328表達水平；Western blot檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白，p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.免疫熒光雙染色結(jié)果顯示，經(jīng)高糖處理的HUVECs呈CD31、α-SMA染色雙陽性；
　　2.與正常葡萄糖組相比，高糖組miR-328表達明顯增高（p＜0.05），差

4、異具有統(tǒng)計學意義；與高糖組及miR-328組相比，經(jīng)U0126處理后miR-328表達明顯降低（p＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；
　　3.與正常葡萄糖組相比，高糖及miR-328處理的HUVECsⅠ、Ⅲ型膠原蛋白表達明顯增多（p＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；與高糖組相比，antagomiR-328組Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白表達明顯減少（p＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；與高糖組及miR-328組相比，經(jīng)U0126處理后Ⅰ、Ⅲ型膠原

5、蛋白表達明顯減少（p＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；
　　4.與正常葡萄糖組相比，高糖及 miR-328處理的 HUVECs， p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平明顯增高（p＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義；與高糖組相比，經(jīng) antagomiR-328處理的 HUVECs， p-MEK1/2、p-ERK1/2表達水平明顯降低（p＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義，經(jīng)過 U0126處理后 p-MEK1/2、p-ERK1/2水