抗水霉藥物的篩選及其制劑的應(yīng)用效果研究.pdf

1、水霉病(Saprolegniasis)是水產(chǎn)養(yǎng)殖中一種由絲狀真菌引起的常見(jiàn)病害，是導(dǎo)致育苗失敗的主要因素之一，在成魚(yú)養(yǎng)殖中也可能發(fā)生水霉病，若不及時(shí)采取措施可能導(dǎo)致該病的大規(guī)模爆發(fā)，使養(yǎng)殖造成巨大損失。
　　 長(zhǎng)期以來(lái)在生產(chǎn)中一直以“孔雀石綠”治療該病，并且有較好的療效。但是孔雀石綠具有高毒性、高殘留、高致痛和致畸性，2002年，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的193號(hào)公告以及NY5072-2002標(biāo)準(zhǔn)《無(wú)公害食品漁用藥物使用準(zhǔn)則》中

2、明確規(guī)定在漁業(yè)領(lǐng)域禁用孔雀石綠。
　　 孔雀石綠的禁用使得在控制水霉病方面缺乏安全有效的替代藥物，生產(chǎn)上對(duì)于水霉病藥物的需求十分強(qiáng)烈。國(guó)內(nèi)外在水霉病藥物的開(kāi)發(fā)方面研究不足，多年來(lái)均無(wú)重大進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)前一階段的研究，已經(jīng)得到了一種具有高效體外抗水霉活性的物質(zhì)--化合物X，為了進(jìn)一步改進(jìn)其性能，本研究從生物防治和化學(xué)結(jié)構(gòu)改造兩個(gè)方面入手，通過(guò)建立藥物篩選模型，初篩、復(fù)配、安全性評(píng)價(jià)、臨床藥效評(píng)價(jià)等過(guò)程，研制出了一種替代“孔雀石

3、綠”的新型藥物，具有一定的創(chuàng)新性和推廣價(jià)值，在實(shí)際的生產(chǎn)應(yīng)用中取得了良好的應(yīng)用效果。解決了水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物水霉病等真菌性疾病防治藥物空白的現(xiàn)狀，在一定程度上為解決“孔雀石綠”的濫用，保障水產(chǎn)品的質(zhì)量安全和人類的健康發(fā)揮了重要的作用。
　　 本研究論文共分為四章。第一章：抗水霉藥物體外藥效評(píng)價(jià)方法的比較；第二章：抗水霉藥物的篩選及其后抑菌效應(yīng)；第三章：抗水霉藥物的復(fù)配及其體外藥效評(píng)價(jià)；第四章：抗水霉藥物的安全性評(píng)價(jià)及其臨床應(yīng)用效果。具

4、體內(nèi)容如下：
　　 第一章：為了尋找一種穩(wěn)定性高、方便快捷的體外藥物篩選及體外藥效評(píng)價(jià)方法，方便各藥物篩選結(jié)果的比較，而且為各藥物的體外藥效評(píng)價(jià)提供統(tǒng)一、可靠的方法，利用常用的體外抗真菌藥敏試驗(yàn)的方法，即液體稀釋法與瓊脂稀釋法進(jìn)行了三種藥物對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保藏的水霉菌株XJ(本實(shí)驗(yàn)室保藏水霉菌株)的體外抑菌效果，這三種藥物包括中草藥五倍子粉末、五水硫酸銅、孔雀石綠，文獻(xiàn)報(bào)道及生產(chǎn)實(shí)踐中均用到這三種藥物來(lái)防治水霉病。通過(guò)研究?jī)煞N不同的體

5、外藥效評(píng)價(jià)方法對(duì)水霉菌絲和孢子的MIC(最小抑菌濃度)值，可以得出如下結(jié)論：藥物對(duì)水霉菌絲的MIC值均大于對(duì)其孢子的MIC值，在藥物初篩時(shí)選擇評(píng)價(jià)藥物對(duì)菌絲的MIC值，由于液體稀釋法與瓊脂稀釋法相比具有更低的MIC值，故采用液體稀釋法進(jìn)行初篩，以保留更多的藥物進(jìn)入下一步的復(fù)篩及體外藥效評(píng)價(jià)。從而得到了可靠的藥物篩選方法。
　　 第二章：從大量的文獻(xiàn)資料和應(yīng)用實(shí)例中廣泛搜集具有潛在抗霉菌活性的物質(zhì)(化合物或單質(zhì))，建立待篩選的藥物

6、庫(kù)，將藥物庫(kù)中的藥物分門(mén)別類的進(jìn)行初步篩選，利用大量液體稀釋法進(jìn)行初篩，對(duì)水霉菌絲的最小抑菌濃度在最高濃度以上的藥物進(jìn)行舍棄，通過(guò)查找相關(guān)資料，進(jìn)一步考慮藥物的理化性質(zhì)，水溶性，毒副作用及使用成木等因素，將毒性大，價(jià)格高的藥物進(jìn)行舍棄。將硫酸銅、硫酸鋁鉀、異噻唑啉酮、磺基水楊酸、尼泊金乙酯、MBT(二硫氰基甲烷)作為復(fù)篩藥物進(jìn)行體外藥效評(píng)價(jià)。通過(guò)兩種方法的體外藥效評(píng)價(jià)，得到了上述藥物對(duì)水霉菌絲及孢子的體外作用效果。同時(shí)研究了兩種優(yōu)良防霉

7、劑的后抗真菌效應(yīng)。
　　 第三章：為了考察上述幾種化合物與化合物X的聯(lián)合使用效果，分別評(píng)價(jià)了異噻唑啉酮、磺基水楊酸、尼泊金乙酯、MBT與化合物X配合使用后對(duì)水霉菌的聯(lián)合抑菌作用，選擇其中與化合物X具有協(xié)同作用的化合物進(jìn)行了不同比例的配比，確定了兩者之間的最佳配比為5:2，以該比例將兩種藥物混合后配以輔料氣相二氧化硅，制成了一種新的抗水霉藥物，即化合物X制劑。測(cè)定了化合物X制劑對(duì)水霉菌的體外作用效果，其對(duì)水霉孢子的MIC值為1pp

8、m，其對(duì)水霉菌絲的MIC為5ppm，為了使生產(chǎn)中的用藥成本最低，建議化合物X制劑的推薦浸泡用量為5mg/L。
　　 第四章：為了驗(yàn)證化合物X制劑在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用效果，進(jìn)行了化合物X制劑的安全性評(píng)價(jià)及臨床應(yīng)用效果研究，化合物X制劑對(duì)大宗淡水養(yǎng)殖魚(yú)類的安全濃度在5mg/L以上，對(duì)魚(yú)卵在50mg/L以內(nèi)是安全的，對(duì)蝦蟹類卵在25mg/L以內(nèi)是安全的。臨床應(yīng)用研究表明，其在5ppm以上時(shí)可以顯著降低水霉病的發(fā)病率(p<0.05)，在5