PKCβ抑制劑對大鼠腎臟缺血再灌注損傷后M1及M2型巨噬細胞浸潤的影響.pdf

1、目的：
　　通過建立不同大鼠腎缺血再灌注損傷模型，分析PKCβ抑制劑對大鼠腎缺血再灌注損傷后M1及M2型巨噬細胞表面標記物及介質(zhì)在腎組織的表達情況，為進一步研究PKCβ抑制劑減輕腎缺血再灌注損傷的機制提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　構(gòu)建不同的大鼠腎缺血再灌注損傷模型，按處理不同分為腎缺血再灌注損傷非灌洗組（A組）、腎缺血再灌注損傷預灌洗組（B組）、PKCβ抑制劑治療組（C組）、假手術(shù)組（D組）。A、B、D組術(shù)前一天予以

2、生理鹽水1ml/只灌胃，C組術(shù)前一天予以PKCβ抑制劑1ml/只灌胃。第二日將A、B、C組打開腹腔充分暴露雙側(cè)腎臟后去掉右側(cè)腎臟，A、C組左側(cè)腎臟予以血管夾鉗夾左側(cè)腎動脈阻斷腎臟血供60min后再恢復血流灌注24h；B組于缺血前予生理鹽水對左側(cè)腎臟進行灌洗沖盡殘留血細胞后以同樣的方法缺血60min后再恢復血液灌注24h；D組僅行開腹、關(guān)腹手術(shù)。24h后處死大鼠分別取左側(cè)腎臟標本進行以下檢測：1.免疫組織化學法分別檢測各組誘導型一氧化氮合

3、酶（iNOS）和白介素-12（IL-12）表達以分析M1型巨噬細胞在腎臟的浸潤情況；2.免疫熒光染色法分別檢測各組巨噬細胞細胞標記物（CD197/CD163）表達以分析M1及M2型巨噬細胞在腎臟的浸潤情況；3.熒光定量PCR法檢測各組樹突狀細胞相關(guān)性C型植物血凝素-1（Dectin-1）、1-型精氨酸酶（Arg-1）mRNA表達分析M2型巨噬細胞在腎臟的浸潤情況。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組織化學法顯示iNOS主要表達于髓質(zhì)

4、外帶近端腎小管上皮細胞胞漿及包膜上，而IL-12主要表達于腎髓質(zhì)的腎小管間質(zhì)中，部分表達于腎小球系膜細胞及腎小管上皮細胞胞漿中。iNOS、IL-12在D組表達很少，在A、B組顯著增加，并且A、B組表達較C組明顯增高（P<0.01）；A組表達高于B組（P<0.01）；iNOS在C組表達較D組明顯增高（P<0.01），但是IL-12在C組與D組表達無差異（P>0.05）。
　　2.免疫熒光染色顯示CD197、CD163主要表達在腎小管

5、腎間質(zhì)中，CD197在D組表達較少，A組表達顯著增高，并且A組表達較B、C組增高（P<0.01）；B組與C組比較二者無明顯差異（P>0.05）；D組表達較A、B、C組降低（P<0.01）。CD163在C組表達較A、B、D組顯著增高（P<0.01）；A、B、D組相互比較均無明顯差異（P>0.05）。
　　3.熒光定量 PCR顯示Dectin-1及Arg-1 mRNA在D組表達很少，C組表達明顯增高，C組表達較A、B、D組明顯增高（P