噬菌體治療耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以鮑曼不動(dòng)桿菌為代表的非發(fā)酵菌成為21世紀(jì)院內(nèi)感染的主要致病菌，由于日益嚴(yán)重的耐藥形勢(shì)，人類已接近無(wú)藥可用的境地。近年已有百年歷史的噬菌體治療再次引起廣泛關(guān)注，希望從中尋求克服細(xì)菌耐藥的新途徑。本研究我們將采用前期篩選的、生物學(xué)信息明確、已進(jìn)行全基因組測(cè)序并在Genbank上注冊(cè)的噬菌體IME-AB2，治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌小鼠肺炎，系統(tǒng)評(píng)價(jià)該株噬菌體用于體內(nèi)治療的有效性和安全性。研究結(jié)果將為耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌的治療提供新思路和

2、實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，研究方法將為噬菌體的個(gè)體化治療提供技術(shù)支持。
　　方法：按照文獻(xiàn)報(bào)道環(huán)磷酰胺300mg/kg腹腔注射預(yù)處理BALB/c小鼠，根據(jù)最小致死量確定鮑曼不動(dòng)桿菌的致傷劑量2×108CFU/mL，滴鼻法構(gòu)建小鼠肺炎模型；治療組給予噬菌體滴鼻治療，PBS滴鼻作為對(duì)照。采用小鼠生存分析、肺部Micro-CT、肺臟組織病理學(xué)等指標(biāo)評(píng)價(jià)治療效果，同時(shí)進(jìn)行噬菌體治療的劑量效果分析和時(shí)間效果分析；分析比較小鼠肺臟組織中細(xì)菌和噬菌體計(jì)數(shù)的動(dòng)態(tài)

3、變化探討治療機(jī)制；觀察小鼠臨床癥狀評(píng)分、脾臟和肝臟病理學(xué)改變、滴定小鼠血液中的噬菌體抗體，進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：根據(jù)臨床癥狀評(píng)分和肺部Micro-CT觀察，本研究成功構(gòu)建了多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎的小鼠模型。小鼠致傷后1 h給予感染復(fù)數(shù)MOI=10的噬菌體劑量治療，小鼠全部存活，PBS對(duì)照組小鼠在感染后60-144小時(shí)內(nèi)全部死亡，半數(shù)小鼠在83小時(shí)內(nèi)死亡，兩組比較P＜0.001。小鼠致傷后1h分別采用感染復(fù)數(shù)為MOI=10、

4、1和0.1劑量的噬菌體進(jìn)行治療，240h的存活率分別是100％、70%和20%；將治療劑量固定為MOI=10，分別在致傷后1、4和24h給與治療生存率分別為100%，60%，20%，顯示了噬菌體治療良好的劑量依賴性和時(shí)間依賴性。肺部Micro-CT顯示試驗(yàn)組小鼠的肺部浸潤(rùn)不僅范圍小而且程度輕。肺臟組織病理學(xué)顯示對(duì)照組小鼠肺部組織出血、水腫及白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯加重，并可見(jiàn)大范圍實(shí)變。2-144h觀察期內(nèi)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，治療組肺組織勻漿中細(xì)菌計(jì)數(shù)

5、均明顯低于對(duì)照組，并且呈進(jìn)行性下降，隨著細(xì)菌計(jì)數(shù)的下降噬菌體數(shù)量也呈下降趨勢(shì)。以癥狀分值評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)小鼠的一般狀況，治療組在前期也呈下降趨勢(shì)，但36小時(shí)后逐漸好轉(zhuǎn)直至痊愈，而對(duì)照組則持續(xù)惡化直至死亡，兩組比較P＜0.001。環(huán)磷酰胺腹腔注射后小鼠脾臟明顯縮小，噬菌體治療可使縮小的脾臟復(fù)原甚至更大，噬菌體治療216h后可以檢測(cè)到噬菌體中和抗體。
　　結(jié)論：噬菌體IME-AB2對(duì)多種耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引起的肺炎小鼠具有良好的治療效果，且安全