柑橘花藥和小孢子培養(yǎng)創(chuàng)制雙單倍體及其分子鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、隨著高通量測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展,純系以其基因組簡(jiǎn)單便于分析而備受關(guān)注。柑橘作為世界上最重要的水果之一,雖然已獲得部分純系材料,但群體較小且涉及的遺傳背景較為相似,因此,擴(kuò)大柑橘純系群體的工作任重道遠(yuǎn)。柑橘?gòu)V泛存在的珠心胚現(xiàn)象,以及童期長(zhǎng)、基因組高度雜合等特點(diǎn),使其無(wú)法通過(guò)傳統(tǒng)的自交獲得純系?;ㄋ幣囵B(yǎng)是創(chuàng)制柑橘純系群體的首選技術(shù)。游離小孢子培養(yǎng)為直觀地呈現(xiàn)胚離體再生過(guò)程提供可能,同時(shí)有效減輕后續(xù)篩選鑒定的工作量,該項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于多個(gè)物種。

2、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)花藥培養(yǎng)擴(kuò)大柑橘純系群體,并嘗試柑橘游離小孢子培養(yǎng);同時(shí),對(duì)前人創(chuàng)制的純系材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定。主要結(jié)果如下:
  1.對(duì)柑橘9個(gè)品種進(jìn)行花藥培養(yǎng),共再生85個(gè)胚狀體,其中枳32個(gè),墨西哥萊檬24個(gè),早花檸檬23個(gè),早金甜橙3個(gè),暗柳橙、露德紅夏橙、紅暗柳橙各1個(gè)。其中46個(gè)胚狀體生芽,部分離體嫁接于枳砧,隨后移栽至溫室,其它仍處于繼代過(guò)程中。選取部分胚狀體提取DNA,通過(guò)SSR分子標(biāo)記鑒定再生胚狀體的基因型,表明枳、紅暗

3、柳橙、早金甜橙均為雜合體;萊檬及墨西哥萊檬均為純合體,所有再生植株倍性均為二倍體?;ㄋ幣囵B(yǎng)過(guò)程中,比較花蕾大小、花期、低溫預(yù)處理時(shí)間對(duì)花藥培養(yǎng)再生率的影響,發(fā)現(xiàn)開(kāi)花在12月的早花檸檬及1月的萊檬再生率明顯高于3月開(kāi)花的枳,而4月開(kāi)花的其它6個(gè)品種的再生率更低;低溫預(yù)處理7-8d,其再生率高于其它預(yù)處理。
  2.對(duì)10個(gè)柑橘品種進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng),參考前人的培養(yǎng)過(guò)程稍加改良,預(yù)處理液以0.4mol/L甘露醇為基礎(chǔ)設(shè)置3種處理,培養(yǎng)

4、基以MCM及BH3為基礎(chǔ)進(jìn)行多種改良,培養(yǎng)密度設(shè)置4個(gè)梯度。對(duì)比多種處理發(fā)現(xiàn),以含1%DMSO的0.4mol/L甘露醇作為預(yù)處理液,小孢子細(xì)胞更傾向于形成類似胚狀體的致密細(xì)胞團(tuán),但其它處理對(duì)小孢子細(xì)胞的再生幾乎沒(méi)有影響。該實(shí)驗(yàn)中獲得的致密細(xì)胞團(tuán)沒(méi)有繼續(xù)發(fā)育。
  3.對(duì)早金甜橙7個(gè)純系愈傷組織進(jìn)行染色體制片,獲得部分較清晰的染色體圖像,發(fā)現(xiàn)雙單倍體愈傷較單倍體愈傷更易發(fā)生染色體加倍,這些不同純系的染色體圖像可以用于后續(xù)的純系細(xì)胞學(xué)

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