山東省水貂出血性肺炎流行現(xiàn)狀及病原學(xué)和耐藥基因的研究.pdf

1、調(diào)查山東省水貂出血性肺炎的流行現(xiàn)狀，研究貂源綠膿桿菌的病原學(xué)和耐藥基因存在狀況，旨在為該病的有效防控、治療藥品和疫苗的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)，降低水貂養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失。自2013-2015年，于省內(nèi)各水貂養(yǎng)殖密集區(qū)358個(gè)疑似發(fā)病養(yǎng)殖場(chǎng)采集病料，調(diào)查發(fā)病情況；無(wú)菌環(huán)境中，采用鑒別培養(yǎng)基從病料中分離純化病原菌；使用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)鑒定和分離保存綠膿桿菌，并進(jìn)行藥敏分析；選用日本生研株式會(huì)社的綠膿桿菌血清學(xué)分型試劑盒將分離菌株分型；用昆明

2、系小白鼠測(cè)定分離株的LD50，選擇改良 Karber法計(jì)算結(jié)果，探究分離株的致病性；利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)耐藥基因 SHV、TEM、PER、VEB、GES、CARB、IMP、VIM、DHA、oprD2、qacEΔ1-sul1、int I1。結(jié)果表明：
　　1．近三年，山東省水貂出血性肺炎的發(fā)病率為47.86％、死亡率31.25%、病死率65.29%，呈逐年上升的流行趨勢(shì)。該病每年從6月中旬開(kāi)始出現(xiàn)，8月達(dá)到發(fā)病最高峰，占全

3、年發(fā)病數(shù)的61%左右，9月發(fā)病開(kāi)始逐漸減少，至9月末10月初發(fā)病明顯減少至不再發(fā)生，發(fā)病高峰期集中在7-9月；青島紅島、濰坊諸城、威海文登、煙臺(tái)海陽(yáng)、臨沂蒼山、日照嵐山和菏澤鄄城是該病的主要流行區(qū)域，濰坊、臨沂、日照和菏澤地區(qū)發(fā)病數(shù)逐年升高，膠東半島的青島、煙臺(tái)和威海逐年減少或與往年持平；60日齡前后水貂開(kāi)始發(fā)病，120日齡左右是發(fā)病死亡的高峰階段，公獸的死亡比率較母獸高20%，發(fā)病死亡的水貂中埋置褪黑激素的占95%以上。
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4、．綠膿桿菌對(duì)氨芐西林、氨芐青霉素-舒巴坦、頭孢唑林、頭孢替坦、頭孢曲松、復(fù)方新諾明和呋喃妥英耐藥率100%，部分菌株對(duì)環(huán)丙沙星、左氧氟沙星耐藥，耐藥率由31.25%逐年升高至71.43%，所有分離株對(duì)頭孢吡肟、頭孢他啶、阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素、哌拉西林鈉他唑巴坦、亞胺培南敏感，少數(shù)分離株對(duì)頭孢他啶和慶大霉素中度敏感；46株分離綠膿桿菌中，B型17株（36.96%），G型13株（28.26%），I型6株（13.04%），E型4株（8

5、.70%），C型3株（6.52%），分型率93.48%，G、E型菌呈逐年上升的流行趨勢(shì)；兩分離株1408015和H1508023綠膿桿菌對(duì)小鼠的 LD50分別為6.3×108 CFU/mL和1.45×108 CFU/mL，G型菌的致病性略強(qiáng)于B型，但沒(méi)有很大的差別（＜5倍量）。
　　3．β-內(nèi)酰胺酶編碼基因TEM、DHA、PER、GES、VEB和IMP陽(yáng)性菌株分別為14株（30.4%）、4株（8.7%）、3株（6.5%）、3株（6

6、.5%）、2株（4.3%）和1株（2.2%），15株（32.6%）外膜通道蛋白o(hù)prD2基因缺失，Ⅰ類(lèi)整合子int I1基因陽(yáng)性8株（17.4%）， qacEΔ-sul1基因陽(yáng)性6株(13.0%)，SHV、CARB和VIM基因均陰性。攜帶β-內(nèi)酰胺酶編碼基因TEM、DHA、PER、GES、VEB、IMP或外膜通道蛋白o(hù)prD2基因缺失的菌株共25株，占分離株的54.3%；攜帶Ⅰ類(lèi)整合子遺傳標(biāo)志基因int I1或qacEΔ-sul1的菌株

7、12株，占分離株的26.1%，其中4株同時(shí)攜帶3種β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因，3株同時(shí)攜帶2種β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因。
　　由此說(shuō)明：
　　1.山東省水貂出血性肺炎的發(fā)病時(shí)間由8月提前至6月中旬，發(fā)病高峰由2個(gè)月延長(zhǎng)至3個(gè)月；主要流行區(qū)域由沿海向內(nèi)陸轉(zhuǎn)移；120日齡左右埋置褪黑激素水貂是該病的易感獸群，公獸的死亡比率較母獸高20%。
　　2.綠膿桿菌對(duì)第三代、第四代半合成頭孢菌素和氨基糖苷類(lèi)抗菌素?zé)o耐藥，對(duì)喹諾酮類(lèi)耐藥率由31

8、.25%逐年升高至71.43%，對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)和磺胺類(lèi)有天然耐藥性。B、G型是引起山東省水貂發(fā)病的主要流行血清型，其菌株對(duì)小鼠的 LD50為別為6.3×108 CFU/mL和1.45×108 CFU/mL，都有較強(qiáng)的致病性。
　　3.分離菌株β-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥與攜帶TEM、DHA、PER、GES、VEB、IMP基因和外膜通道蛋白o(hù)prD2基因缺失有關(guān)。Ⅰ類(lèi)整合子對(duì)貂源綠膿桿菌耐藥性的傳播和多重耐藥有關(guān)鍵作用，氧氟沙星和環(huán)丙沙星耐藥率