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1、多能性間充質(zhì)干細胞(MSCs)屬于骨髓基質(zhì)前體細胞，具有向成骨細胞、成軟骨細胞、成脂細胞和成肌細胞分化的能力。前期體內(nèi)外實驗證實， BMP9為BMPs家族中誘導(dǎo)成骨分化能力最強的因子之一，但是BMP9誘導(dǎo)成骨分化過程中所涉及到的具體分子機制還需要深入研究。為了觀察SDF-1/CXCR4信號軸在BMP9促MSCs成骨分化過程中的作用，我們構(gòu)建并鑒定過表達SDF-1重組腺病毒，并通過重組腺病毒技術(shù)過表達BMP9，檢測對C3H10T1/2細胞
2、中SDF-1及受體CXCR4 mRNA和蛋白表達水平的影響;同時利用重組腺病毒或中和抗體干擾SDF-1/CXCR4，與BMP9先后作用于C3H10T1/2和HS5細胞，確定CXCR4在信號通路中的作用，并通過定量和染色測定堿性磷酸酶(ALP)表達，免疫細胞化學(xué)測定骨鈣蛋白(OCN)表達，茜素紅S染色測定鈣鹽沉積，real time PCR檢測成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osx、Plzf和Dlx5的表達，Western blot檢測成骨分
3、化信號通路Smad和MAPK的變化，以及熒光素酶報告基因檢測Smad的變化。結(jié)果顯示，成功獲得過表達SDF-1的重組腺病毒Ad-SDF-1，BMP9能明顯抑制C3H10T1/2細胞中SDF-1、CXCR4的表達，且具有劑量和時間依賴性;預(yù)先干擾SDF-1/CXCR4能明顯影響由BMP9介導(dǎo)的早、中期成骨標(biāo)志物ALP、OCN及早期轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osx、Plzf和Dlx5的表達和Smad、MAPK信號通路相關(guān)蛋白的變化;外源性SDF-
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