腎虛質(zhì)大鼠免疫基因表達與腎藏象理論相關(guān)性研究.pdf

1、目的:本課題根據(jù)腎虛質(zhì)的生理病理特點，從差異性角度研究腎藏象理論，在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)完善具有中醫(yī)體質(zhì)理論特色的腎虛質(zhì)大鼠造模方法;篩選腎虛質(zhì)大鼠的特異性免疫分子標志物，以及免疫相關(guān)差異表達基因，深入探討腎虛質(zhì)與免疫的相關(guān)性，以及改善腎虛質(zhì)的有效藥物，為腎藏象理論的現(xiàn)代研究提供新的思路與方法，以期豐富和發(fā)展腎藏象理論。
　　 方法:以中醫(yī)“恐傷腎”理論為指導(dǎo)，采用“貓嚇鼠”的方法，先造成母鼠腎精受損，子鼠先天不足，再對先天不

2、足的子鼠進行驚嚇，造成先天不足、后天失養(yǎng)的復(fù)合型腎虛質(zhì)動物模型，并選用桂附地黃丸(0.9375g/kg)對腎虛質(zhì)動物進行調(diào)理。采用ELISA法檢測大鼠血清IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量的變化，運用流式細胞儀檢測脾臟T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+百分率及CD4+/CD8+比值的變化，應(yīng)用基因芯片技術(shù)比較分析腎虛質(zhì)大鼠與正常質(zhì)大鼠及補腎藥物干預(yù)后的腎虛質(zhì)大鼠脾臟淋巴細胞免疫相關(guān)差異表達基因譜。

3、　　 結(jié)果:①外周血清細胞因子含量的檢測：與空白組比較，模型組IL-2、IL-10、IFN-γ的含量均降低，IL-6、TNF-α的含量升高，其中IL-2、IFN-γ的降低和TNF-α的升高有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；與模型組比較，藥物組IL-2、IL-10、IFN-γ的含量均升高，IL-6，TNF-α的含量降低。②脾臟T淋巴細胞亞群的檢測：與空白組相比，模型組CD3+、CD4+百分率下降，CD8+百分率升高，CD4+/CD8+比值小

4、于1.0,其中CD4+百分率、CD4+/CD8+比值降低有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；與模型組比，藥物組CD3+、CD4+百分率升高，CD8+百分率降低，CD4+/CD8+比值大于1.0。③免疫相關(guān)差異表達基因的篩選：模型組與空白組大鼠脾臟淋巴細胞mRNA雜交得到了149條差異表達基因，其中免疫相關(guān)的基因77條；藥物干預(yù)后與模型組雜交得到了45條差異表達基因，其中免疫相關(guān)的基因有26條。通過對以上免疫相關(guān)的基因的統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)有12條基

5、因在兩次雜交中均有差異，其中有5條基因在模型組表達上調(diào)，經(jīng)藥物干預(yù)后表達下調(diào)；有7條基因在模型組表達下調(diào)，經(jīng)藥物干預(yù)后表達上調(diào)。
　　 結(jié)論:本實驗建立的先天不足+后天驚恐之復(fù)合型腎虛質(zhì)動物模型，具有中醫(yī)體質(zhì)理論特色和操作的可行性，符合腎虛質(zhì)形成的多因素特點；腎虛質(zhì)大鼠存在著免疫穩(wěn)態(tài)失衡，外周血清中細胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α的含量變化與腎虛質(zhì)有一定的相關(guān)性，脾臟T淋巴細胞亞群中CD3+、CD4