藍(lán)靛果花色苷提取及其抗腫瘤功能機(jī)理的初步研究.pdf

1、花色苷具有消除自由基、抗衰老、抗異變、抗炎癥、改善視力、預(yù)防和治療心血管疾病、抗癌、提高免疫力等多種生理活性功能。從藍(lán)靛果(Lonicera edulis Turcz.)中提取花色苷并對(duì)其生理活性功能進(jìn)行研究,對(duì)藍(lán)靛果的進(jìn)一步開發(fā)和利用具有十分重要的實(shí)際意義。本論文利用藍(lán)靛果為原料,對(duì)藍(lán)靛果花色苷的提取條件進(jìn)行研究,并對(duì)藍(lán)靛果花色苷進(jìn)行分離純化,對(duì)藍(lán)靛果花色苷的抗氧化活性和抗腫瘤功能機(jī)理進(jìn)行了研究。
　　 采用溶劑浸提法提取藍(lán)靛

2、果中具有抗氧化活性的花色苷,通過正交試驗(yàn)確定其最佳提取工藝條件。分別采用紫外分光光度法、H2O2/Fe體系和DPPH法測(cè)定花色苷的提取量及其抗氧化活性。結(jié)果表明:各因素對(duì)藍(lán)靛果花色苷體外抗氧化作用影響程度的大小關(guān)系為:提取劑濃度>料液比>提取溫度>提取時(shí)間。提取溶劑乙醇濃度為70％,料液比1:15(W:V),提取溫度60℃,提取時(shí)間90min,pH值2,提取3次為最佳提取工藝參數(shù)。
　　 將不同濃度的藍(lán)靛果花色苷作用于人結(jié)腸癌H

3、T29、人肝癌HepG2和人肉瘤U-20S三種腫瘤細(xì)胞24 h、48h和72h,采用四甲基偶氮唑鹽(MTF)比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖。結(jié)果表明藍(lán)靛果花色苷對(duì)三種腫瘤細(xì)胞都具有抑制作用,且呈現(xiàn)量效和時(shí)效依賴關(guān)系,即隨著花色苷濃度的增大,作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制率顯著增加。
　　 不同濃度藍(lán)靛果花色苷作用結(jié)腸癌HT29細(xì)胞48h,用Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果表明隨著花色苷濃度的增大,各組細(xì)胞凋亡數(shù)隨之增大。

4、加藥組(0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL)的凋亡率分別是(10.11±1.84)％、(28.87±2.32)％、(54.74±4.69)％、(73.56±8.34)％,與對(duì)照組相比,加藥組的凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)腸癌HT29細(xì)胞分別出現(xiàn)了細(xì)胞數(shù)量明顯減少,體積縮小,皺縮變形,細(xì)胞表面有許多的球狀突起,進(jìn)一步有凋亡小體產(chǎn)生,細(xì)胞間連接逐漸斷裂,細(xì)胞漿出現(xiàn)較多空泡,胞漿濃縮,核物質(zhì)致密,呈斑塊狀,或呈新月形邊集

5、于核膜,核形不規(guī)整等典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。DNA凝膠電泳結(jié)果可以看到細(xì)胞凋亡的梯形條帶,單細(xì)胞凝膠電泳顯示細(xì)胞出現(xiàn)明顯的拖尾現(xiàn)象。線粒體膜電位水平逐漸下降,且顯著低于正常細(xì)胞水平；Caspase-3酶活性隨著花色苷濃度的增加而升高,且與對(duì)照組細(xì)胞酶活性相比,差異性顯著(P<0.05)。
　　 綜上所述,藍(lán)靛果花色苷可能通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖;藍(lán)靛果花色菅誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通