藍靛果花色苷提取及其抗腫瘤功能機理的初步研究.pdf

1、花色苷具有消除自由基、抗衰老、抗異變、抗炎癥、改善視力、預防和治療心血管疾病、抗癌、提高免疫力等多種生理活性功能。從藍靛果(Lonicera edulis Turcz.)中提取花色苷并對其生理活性功能進行研究,對藍靛果的進一步開發(fā)和利用具有十分重要的實際意義。本論文利用藍靛果為原料,對藍靛果花色苷的提取條件進行研究,并對藍靛果花色苷進行分離純化,對藍靛果花色苷的抗氧化活性和抗腫瘤功能機理進行了研究。
　　 采用溶劑浸提法提取藍靛

2、果中具有抗氧化活性的花色苷,通過正交試驗確定其最佳提取工藝條件。分別采用紫外分光光度法、H2O2/Fe體系和DPPH法測定花色苷的提取量及其抗氧化活性。結(jié)果表明:各因素對藍靛果花色苷體外抗氧化作用影響程度的大小關(guān)系為:提取劑濃度>料液比>提取溫度>提取時間。提取溶劑乙醇濃度為70％,料液比1:15(W:V),提取溫度60℃,提取時間90min,pH值2,提取3次為最佳提取工藝參數(shù)。
　　 將不同濃度的藍靛果花色苷作用于人結(jié)腸癌H

3、T29、人肝癌HepG2和人肉瘤U-20S三種腫瘤細胞24 h、48h和72h,采用四甲基偶氮唑鹽(MTF)比色法檢測細胞增殖。結(jié)果表明藍靛果花色苷對三種腫瘤細胞都具有抑制作用,且呈現(xiàn)量效和時效依賴關(guān)系,即隨著花色苷濃度的增大,作用時間的延長,抑制率顯著增加。
　　 不同濃度藍靛果花色苷作用結(jié)腸癌HT29細胞48h,用Annexin V-FITC/PI流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。結(jié)果表明隨著花色苷濃度的增大,各組細胞凋亡數(shù)隨之增大。

4、加藥組(0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL)的凋亡率分別是(10.11±1.84)％、(28.87±2.32)％、(54.74±4.69)％、(73.56±8.34)％,與對照組相比,加藥組的凋亡率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)腸癌HT29細胞分別出現(xiàn)了細胞數(shù)量明顯減少,體積縮小,皺縮變形,細胞表面有許多的球狀突起,進一步有凋亡小體產(chǎn)生,細胞間連接逐漸斷裂,細胞漿出現(xiàn)較多空泡,胞漿濃縮,核物質(zhì)致密,呈斑塊狀,或呈新月形邊集

5、于核膜,核形不規(guī)整等典型的凋亡細胞形態(tài)學特征。DNA凝膠電泳結(jié)果可以看到細胞凋亡的梯形條帶,單細胞凝膠電泳顯示細胞出現(xiàn)明顯的拖尾現(xiàn)象。線粒體膜電位水平逐漸下降,且顯著低于正常細胞水平；Caspase-3酶活性隨著花色苷濃度的增加而升高,且與對照組細胞酶活性相比,差異性顯著(P<0.05)。
　　 綜上所述,藍靛果花色苷可能通過誘導腫瘤細胞凋亡來顯著抑制腫瘤細胞的增殖;藍靛果花色菅誘導腫瘤細胞凋亡的機制可能與線粒體介導的細胞凋亡通