A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗的臨床應(yīng)用和保護(hù)效果評價.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens），又稱魏氏梭菌，存在于很多健康動物的腸道中，當(dāng)飼養(yǎng)和環(huán)境條件改變時，可引起畜禽的的產(chǎn)氣莢膜梭菌病，一旦發(fā)病，會導(dǎo)致畜禽迅速死亡，病程極短，往往在未得到有效治療前便死亡。近年來產(chǎn)氣莢膜梭菌病已經(jīng)致使養(yǎng)殖業(yè)遭受巨大經(jīng)濟(jì)損失。
　　其中A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起家兔腹瀉性腸炎的主要致病菌，該菌在腸道內(nèi)繁殖產(chǎn)生α毒素導(dǎo)致家兔發(fā)病。此類病的發(fā)病急、死亡率高、發(fā)病后用藥治療效果不明顯，

2、因此為了有效預(yù)防和控制產(chǎn)氣莢膜梭菌病的發(fā)生，研制高效、安全的類毒素疫苗和評價其效力刻不容緩。ELISA方法，具有特異、敏感、迅速、可以大批量檢測抗體的優(yōu)勢，可用于檢測和診斷產(chǎn)氣莢膜梭菌病，也可應(yīng)用于疫苗保護(hù)效果的評價及流行病學(xué)調(diào)查。
　　本研究對A型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌種（NCTC528）進(jìn)行復(fù)蘇、增菌、產(chǎn)毒，得到以α毒素為主的外毒素溶液。將制備的外毒素通過甲醛滅活，與白油佐劑混合乳化后，成功制備了A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗；另一方

3、面；將外毒素經(jīng)過過濾除菌，飽和硫酸銨沉淀等方法對外毒素蛋白進(jìn)行提取。以毒素蛋白作為間接ELISA的包被抗原，摸索優(yōu)化反應(yīng)條件，最終建立了產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素抗體檢測的間接ELISA方法。運(yùn)用該方法對免疫過疫苗的家兔進(jìn)行抗體水平的連續(xù)監(jiān)測，以此來確定疫苗的最小免疫劑量和合理的免疫程序。
　　疫苗臨床保護(hù)效果的評價試驗(yàn)：將疫苗分為4個不同的劑量，分別對28日齡和45日齡的家兔各400只首免，28日齡家兔長至45日齡時對家兔進(jìn)行二免；通過攻