斷藤益母湯對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者樹(shù)突狀細(xì)胞趨化因子分泌和受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，研究斷藤益母湯對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者外周血樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)遷移功能相關(guān)的趨化因子和受體表達(dá)的影響，從DC遷移功能的角度來(lái)探討斷藤益母湯的免疫抑制和治療RA的機(jī)制。
　　方法:
　　密度梯度離心法分離RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，采用貼壁法分離出單核細(xì)胞，并以粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素

2、-4（IL-4）刺激7天以使單核細(xì)胞分化成樹(shù)突狀細(xì)胞，分別加入甲氨蝶呤（陽(yáng)性對(duì)照）、斷藤益母湯凍干粉（試驗(yàn)組）進(jìn)行干預(yù)，隨后以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)定上清液中細(xì)胞因子CXCL9和CXCL10的含量，并收集細(xì)胞，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)DC表面CCR5和CCR7的表達(dá)水平，并與空白組進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果:
　　1.在GM-CSF和IL-4的共同刺激下，外周血單核細(xì)胞成功分化成為DC，在光鏡下可觀察到DC的典型樹(shù)突狀形態(tài)。

3、
　　2.根據(jù)CCK8的細(xì)胞毒理-增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果，比較相同時(shí)間點(diǎn)下，不同斷藤益母湯濃度組與正常組的A值，得出斷藤益母湯凍干粉的最佳給藥質(zhì)量體積比為100mg/ml。
　　3.經(jīng)ELISA法檢測(cè)后，結(jié)果顯示，與空白組對(duì)比，經(jīng)斷藤益母湯凍干粉及甲氨蝶呤干預(yù)后DC培養(yǎng)的上清液中CXCL9、CXCL10濃度均明顯下降（P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而斷藤益母湯凍干粉干預(yù)組與甲氨蝶呤組對(duì)比，CXCL9、CXCL10濃度下降不明顯(

4、P＞0.05)，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.流式細(xì)胞結(jié)果顯示，經(jīng)斷藤益母湯凍干粉及甲氨蝶呤干預(yù)后的DC表面CCR5和CCR7的表達(dá)均明顯下調(diào)（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而斷藤益母湯凍干粉干預(yù)組與甲氨蝶呤組對(duì)比，CCR5和CCR7的表達(dá)略有下調(diào)（P＞0.05），但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　斷藤益母湯可以下調(diào)RA患者外周血DC表面CCR5和CCR7的表達(dá)，減少趨化因子CXCL9和CXCL10的分泌，