斷藤益母湯對類風濕關(guān)節(jié)炎患者樹突狀細胞趨化因子分泌和受體表達的影響.pdf

1、目的:
　　通過體外實驗，研究斷藤益母湯對類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者外周血樹突狀細胞(dendritic cell，DC)遷移功能相關(guān)的趨化因子和受體表達的影響，從DC遷移功能的角度來探討斷藤益母湯的免疫抑制和治療RA的機制。
　　方法:
　　密度梯度離心法分離RA患者外周血單個核細胞(PBMCs)，采用貼壁法分離出單核細胞，并以粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素

2、-4（IL-4）刺激7天以使單核細胞分化成樹突狀細胞，分別加入甲氨蝶呤（陽性對照）、斷藤益母湯凍干粉（試驗組）進行干預(yù)，隨后以酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)測定上清液中細胞因子CXCL9和CXCL10的含量，并收集細胞，利用流式細胞技術(shù)檢測DC表面CCR5和CCR7的表達水平，并與空白組進行對比。
　　結(jié)果:
　　1.在GM-CSF和IL-4的共同刺激下，外周血單核細胞成功分化成為DC，在光鏡下可觀察到DC的典型樹突狀形態(tài)。

3、
　　2.根據(jù)CCK8的細胞毒理-增殖實驗結(jié)果，比較相同時間點下，不同斷藤益母湯濃度組與正常組的A值，得出斷藤益母湯凍干粉的最佳給藥質(zhì)量體積比為100mg/ml。
　　3.經(jīng)ELISA法檢測后，結(jié)果顯示，與空白組對比，經(jīng)斷藤益母湯凍干粉及甲氨蝶呤干預(yù)后DC培養(yǎng)的上清液中CXCL9、CXCL10濃度均明顯下降（P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學意義;而斷藤益母湯凍干粉干預(yù)組與甲氨蝶呤組對比，CXCL9、CXCL10濃度下降不明顯(

4、P＞0.05)，差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　4.流式細胞結(jié)果顯示，經(jīng)斷藤益母湯凍干粉及甲氨蝶呤干預(yù)后的DC表面CCR5和CCR7的表達均明顯下調(diào)（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義;而斷藤益母湯凍干粉干預(yù)組與甲氨蝶呤組對比，CCR5和CCR7的表達略有下調(diào)（P＞0.05），但差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　斷藤益母湯可以下調(diào)RA患者外周血DC表面CCR5和CCR7的表達，減少趨化因子CXCL9和CXCL10的分泌，