苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)毒物動力學研究.pdf

1、苯嗪草酮,商品名為Goltix,化學名為4-氨基-3-甲基-6-苯基1,2,4三嗪-5酮,是1975年聯(lián)邦德國的拜耳(bayer)公司研制推廣開發(fā)的低毒、低殘留除草劑新品種。苯嗪草酮主要通過植物根部吸收,再輸送到葉子內(nèi),通過抑制光合作用的希爾反應而起到殺草的作用。作為我國應用新型的除草劑之一,應用非常廣泛。苯嗪草酮在土壤中的光解作用得到證實,在水中光解后產(chǎn)生氨基的脫氨基作用也被證實。但是目前國內(nèi)外對苯嗪草酮的在動物體內(nèi)的毒物動力學方面和

2、藥理學方面研究鮮有報道。所以闡明其在動物機體內(nèi)的代謝過程有著非常重要的意義。本實驗研究目的是通過動物模型研究分析苯嗪草酮在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)運過程。重點探討了苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)的毒物動力學規(guī)律、組織分布及排泄情況,為進一步進行毒作用及機制研究奠定基礎。
　　第一部分：苯嗪草酮高效液相色譜分析方法建立
　　目的:建立苯嗪草酮原藥的高效液相色譜檢測方法,對檢測條件進行優(yōu)化,并對建立的檢測方法進行評估。
　　方法:分別改變紫外檢測

3、波長,流動相配比,柱溫及流速對苯嗪草酮同一濃度標準溶液進行檢測,建立并優(yōu)化苯嗪草酮高效液相色譜檢測方法;配置苯嗪草酮原藥系列標準溶液濃度,通過建立的檢測方法進行檢測,得出標準曲線,分析相關性;以空白血清為例,配置高、中、低三種濃度標準溶液,對建立方法的回收率,日間日內(nèi)精密度,樣品常溫下及凍融穩(wěn)定性進行評估。
　　結(jié)果:經(jīng)優(yōu)化后HPLC檢測苯嗪草酮原藥條件為:色譜柱:150mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱,內(nèi)填μBondapark

4、C18,粒徑:5μm;流動相:乙腈:水=1:1;流速:0.5mL/min;柱溫為25°C;檢測波長:306mm;進樣量:20μl。苯嗪草酮出峰時間為4.36min;標準曲線線性相關R2=0.9999,最低檢出限為0.2μg/ml,不同濃度平均回收率均在95.3％～105.20%之間,日內(nèi)精密度均小于4.63%,日間精密度小于5.52%,常溫下放置12小時穩(wěn)定性RSD%均小于1.29%,-20℃冷凍10天溶解后穩(wěn)定性RSD%均小于0.89

5、%。
　　結(jié)論:建立的苯嗪草酮原藥HPLC檢測方法適用于對苯嗪草酮樣本的檢測。
　　第二部分：苯嗪草酮血藥濃度隨時間變化及毒代動力學參數(shù)研究
　　目的:觀察苯嗪草酮在大鼠血清中的濃度隨時間的變化,并求出主要血藥動力學參數(shù)。
　　方法:隨機選取健康成年雌雄大鼠各4只,雄性組染毒劑量為2000mg/kg,雌性組染毒劑量1360mg/kg,采用灌胃方式染毒,灌胃容量為0.5ml/100g,并于染毒后5、15、30min

6、和1、2、4、8、12、24h采血,分離血清,經(jīng)乙腈提取處理后,采用高效液相色譜法檢測血清中苯嗪草酮的濃度,DAS3.0軟件計算毒代動力學參數(shù)。
　　結(jié)果:雌雄大鼠于染毒5min后均檢測到苯嗪草酮,血毒濃度均符合一級吸收一室模型,雄性毒動學方程為C=8.79(e-0.39t-e-1.04t),雌性大鼠毒動學方程為C=4.96(e-0.13t-e-2.01t)。雄性大鼠在染毒后血毒濃度達峰時間是Tmax=2h,達峰濃度為Cmax=6

7、5.96mg/L,雌性大鼠達峰時間是Tmax=3.5h,達峰濃度時為Cmax=40mg/L,雌雄大鼠毒物吸收半衰期t1/2Ka分別為0.76±0.13和0.69±0.13(h),吸收速率常數(shù)Ka分別為2.01±0.34和1.04±0.24(1/h),消除半衰期t1/2Ke分別為7.34±3.02和2.12±0.96(h),消除速率常數(shù)分別為0.13±0.02和0.39±0.20(1/h),藥-時曲線下面積AUC0-t分別為1594.08

8、±446.16和975.36±513.54(mg/L*h),AUC0-∞分別為1832.76±462.52和977.37±512.98(mg/L*h),清除率CL分別為0.78±0.21和2.58±1.40(L/h/kg),表觀分布容積Vd分別為10.76±6.41和8.33±7.45(L/kg)。結(jié)論:苯嗪草酮經(jīng)口染毒后能迅速的被大鼠吸收并達到高峰,提示在大鼠體內(nèi)分布廣泛,但是雌雄大鼠對毒物代謝具有明顯的性別差異。
　　第三部分

9、：苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)組織分布研究
　　目的:觀察苯嗪草酮經(jīng)消化道吸收后,在大鼠體內(nèi)各個組織中的毒物分布及隨時間變化的趨勢。
　　方法:隨機抽取健康SD雄性大鼠24只,分為6組,染毒后,分別在0.5h,2h,4h,8h,24h,168h,斷頭處死各組大鼠,取心,肝,脾,肺,腎,腦,睪丸,脂肪,肌肉組織,經(jīng)勻漿,提取,離心,取上清,揮干,復溶制備樣品后,通過高效液相色譜(HPLC)檢測;通過EXCEL工具處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)

10、果:雄性大鼠灌胃染毒后,0.5h可以在每個組織中檢測到,每個組織中藥物濃度隨時間變化各具有特點,達峰時間不同,峰值也不同,其中肝臟的峰值含量最高,其次為心、腦、脾、脂肪、肌肉、肺、腎、睪丸;組織中藥物濃度在4h前,均小于血液中濃度;在24h時苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)脂肪中含量仍較高;7d時,在心,脾,肺中仍可檢測到原藥。
　　結(jié)論:證實了苯嗪草酮在大鼠體內(nèi)分布廣泛,部分組織可能具有一定的蓄積性,同時說明苯嗪草酮可以通過血腦屏障和血睪屏障

11、,是否具有神經(jīng)毒性和遺傳毒性還有待于經(jīng)一步研究。
　　第四部分:大鼠對苯嗪草酮排泄方式研究
　　目的:觀察苯嗪草酮排泄情況,檢測糞尿中藥物含量隨時間的變化趨勢及主要排泄方式。
　　方法:隨機抽取健康SD雄性大鼠4只,經(jīng)口一次性灌胃染毒后,放入代謝籠,連續(xù)7d同一時間收集糞尿,糞樣經(jīng)烘干,碾磨,提取,離心,取上清,揮干,復溶后制備;尿液經(jīng)離心,過濾后,提取,分離,揮干,復溶后制備;糞尿樣品通過HPLC檢測,結(jié)果使用EXC