木薯再生體系的建立和HNL24b基因的克隆及輻照誘變育種.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文木薯再生體系的建立和HNL24b基因的克隆及輻照誘變育種姓名：范明霞申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：羅利軍2010121 華中農業(yè)大學2 0 1 0 屆博士研究生學位論文4 ．探討了用不同的方法提取木薯的黜蛆，研究發(fā)現(xiàn)用改良C T 蛆與L i C l 相結合的方法，可以提取到質量較好的R N A 。5 ．本研究成功克隆到肋憶2 袖基因，本研究克隆的M 艦2 鈾序列與此砒彳的氨基酸同源性達8 7 ．7

2、 2 ％，與尼h 團憶的氨基酸同源性達8 6 ．3 2 ％，與H N L 2 4 的氨基酸同源性達4 2 ．8 1 ％。預測該基因編碼的蛋白中1 ．1 5 位氨基酸區(qū)域屬于信號肽區(qū)域，3 1 ．2 5 2 位氨基酸區(qū)域屬于水解酶特有的“p 折疊結構域。該蛋白具有水解酶的活化中心位點：絲氨酸，天門冬氨酸和谷氨酸( s 酬唧／哲u ) 。預測此編碼蛋白域的組成元素有：1 3 4 4 個C 、2 0 9 1 個H 、3 4 3 個N 、3 7

3、 9 個O 、7 個S 。6 ．成功從馬鈴薯中克隆到塊根特異表達啟動子尸口紀砌6 ，它與已報道的陽細砌啟動子序列有9 5 ％的相似性。7 ．成功構建原核表達載體，并獲得有功能的表達蛋白，經酶活測定勱憶2 鈾的最高酶活力為2 9 7 8 U ／L 。8 ．成功構建勱憶2 鈾基因的超表達載體、反義表達載體以及G U S 表達載體，并獲得轉化子；成功構建了塊根特異表達載體。腳憶2 和基因在轉基因植株中的表達，能有效的減少植株中氰化物的含量。9