木薯再生體系的建立和HNL24b基因的克隆及輻照誘變育種.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文木薯再生體系的建立和HNL24b基因的克隆及輻照誘變育種姓名：范明霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：羅利軍2010121 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2 0 1 0 屆博士研究生學(xué)位論文4 ．探討了用不同的方法提取木薯的黜蛆，研究發(fā)現(xiàn)用改良C T 蛆與L i C l 相結(jié)合的方法，可以提取到質(zhì)量較好的R N A 。5 ．本研究成功克隆到肋憶2 袖基因，本研究克隆的M 艦2 鈾序列與此砒彳的氨基酸同源性達(dá)8 7 ．7

2、 2 ％，與尼h 團(tuán)憶的氨基酸同源性達(dá)8 6 ．3 2 ％，與H N L 2 4 的氨基酸同源性達(dá)4 2 ．8 1 ％。預(yù)測(cè)該基因編碼的蛋白中1 ．1 5 位氨基酸區(qū)域?qū)儆谛盘?hào)肽區(qū)域，3 1 ．2 5 2 位氨基酸區(qū)域?qū)儆谒饷柑赜械摹皃 折疊結(jié)構(gòu)域。該蛋白具有水解酶的活化中心位點(diǎn)：絲氨酸，天門冬氨酸和谷氨酸( s 酬唧／哲u ) 。預(yù)測(cè)此編碼蛋白域的組成元素有：1 3 4 4 個(gè)C 、2 0 9 1 個(gè)H 、3 4 3 個(gè)N 、3 7

3、 9 個(gè)O 、7 個(gè)S 。6 ．成功從馬鈴薯中克隆到塊根特異表達(dá)啟動(dòng)子尸口紀(jì)砌6 ，它與已報(bào)道的陽(yáng)細(xì)砌啟動(dòng)子序列有9 5 ％的相似性。7 ．成功構(gòu)建原核表達(dá)載體，并獲得有功能的表達(dá)蛋白，經(jīng)酶活測(cè)定勱憶2 鈾的最高酶活力為2 9 7 8 U ／L 。8 ．成功構(gòu)建勱憶2 鈾基因的超表達(dá)載體、反義表達(dá)載體以及G U S 表達(dá)載體，并獲得轉(zhuǎn)化子；成功構(gòu)建了塊根特異表達(dá)載體。腳憶2 和基因在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)，能有效的減少植株中氰化物的含量。9