牛源大腸桿菌耐藥性和耐藥基因檢測(cè)及對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物防突變濃度的測(cè)定.pdf

1、為預(yù)防和治療細(xì)菌性疾病，抗菌藥物被廣泛的應(yīng)用于生物學(xué)領(lǐng)域，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中抗菌藥物更是作為飼料添加劑被大量使用，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥現(xiàn)象變得嚴(yán)重，給細(xì)菌性疾病的防治帶來(lái)極大挑戰(zhàn)。大腸桿菌作為環(huán)境和機(jī)體共生菌，同時(shí)又是病原菌，其在耐藥性傳播方面的重要作用一直受到了人們的廣泛關(guān)注。
　　本研究根據(jù)大腸桿菌phoA持家基因序列設(shè)計(jì)引物，建立對(duì)牛源大腸桿菌的PCR檢測(cè)方法，測(cè)序結(jié)果顯示，擴(kuò)展片段與大腸桿菌phoA持家基因相似性高，達(dá)99.7％，根據(jù)

2、建立的PCR檢測(cè)方法對(duì)臨床分離菌進(jìn)行檢測(cè)，鑒定出105株牛源大腸桿菌。大腸桿菌phoA持家基因PCR檢測(cè)方法，與傳統(tǒng)鑒定方法相比具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，檢測(cè)時(shí)間短等特點(diǎn)。
　　本研究參照CLSI推薦的Kirby-Baue法對(duì)105株分離菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:分離菌對(duì)22種抗菌藥物均產(chǎn)生不同程度的耐藥性，對(duì)7種抗菌藥物的耐藥率超過(guò)50％，其中RA(84.76％)，AMP(73.58％)，TC(69.52％)，SIZ(5

3、9.05％)的耐藥情況嚴(yán)重，而對(duì)AMK(84.76％)，OFL(80.00％)，CIP(76.92％)和NOR(76.19％)等藥物較敏感，這些敏感藥物多為獸醫(yī)臨床較少使用的抗菌藥物。多重耐藥指數(shù)的計(jì)算結(jié)果顯示，不同地區(qū)其值存在顯著性差異。分離菌呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，且不同地區(qū)耐藥譜系不同，105株分離菌表現(xiàn)出21種耐藥譜，其中最少耐1種藥物，最多耐21種藥物。分離菌對(duì)9種抗菌藥物的主要耐藥表型有15種，其中AMP+S+TC+C+SIZ和A

4、MP+SIZ耐藥表型所占比例最大。由此可見(jiàn)，檢測(cè)地區(qū)的牛源大腸桿菌多重耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重，耐藥譜廣，耐藥現(xiàn)狀復(fù)雜。
　　本研究采用PCR方法檢測(cè)耐藥基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明:在被檢測(cè)的19種耐藥基因中，只有blaCMY-2基因沒(méi)有檢測(cè)到，其中sul3基因檢出率最高(28.57％)，qeqA基因檢出率最低(4.76％)，且不同地區(qū)耐藥基因的攜帶率存在差異。通過(guò)耐藥性和耐藥基因一致性分析可知，分離菌株中存在有耐藥性但不攜帶耐藥基因的情況;同時(shí)也

5、存在攜帶耐藥基因但不表現(xiàn)耐藥表型的情況。多重耐藥菌株的出現(xiàn)勢(shì)必對(duì)牛大腸桿菌病的防治帶來(lái)困難，臨床用藥時(shí)應(yīng)選擇敏感藥物，防止耐藥性的產(chǎn)生。
　　本研究采用微量稀釋法和瓊脂平板稀釋法，分別測(cè)定環(huán)丙沙星和氧氟沙星對(duì)14株臨床分離牛源大腸桿菌敏感株的MIC和MPC，計(jì)算和SI。結(jié)果顯示氧氟沙星和環(huán)丙沙星的MIC90分別為0.47μg/ml和1.14μg/ml。以不同濃度MIC為基線(xiàn)測(cè)定2種藥物對(duì)大腸桿菌MPC，結(jié)果顯示氧氟沙星和環(huán)丙沙星對(duì)

6、牛源大腸桿菌敏感菌株的MPC90范圍分別為0.13～4.11μg/ml和0.96～32.22μg/ml，氧氟沙星的SI(2～8)低于環(huán)丙沙星的SI(8～32)。由此可見(jiàn)氧氟沙星的抗菌活力優(yōu)于環(huán)丙沙星，且防突變能力也強(qiáng)于環(huán)丙沙星。
　　綜上所述，本研究檢測(cè)的黑龍江部分地區(qū)的牛源大腸桿菌的耐藥情況較為嚴(yán)重，出現(xiàn)多重耐藥菌株，且攜帶多種耐藥基因。在防治細(xì)菌性疾病時(shí)，應(yīng)在藥敏試驗(yàn)的指導(dǎo)下選擇抗菌藥物，建立以MSW為理論依據(jù)的給藥策略，以防