山東省禽源大腸桿菌氨基糖苷類藥物耐藥性檢測及耐藥質(zhì)粒分析.pdf

1、氨基糖苷類抗生素是臨床上治療革蘭氏陰性菌所致嚴(yán)重感染的常用藥，常與β?內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)合應(yīng)用。近年來，細(xì)菌對此類抗生素的耐藥率不斷上升，且已出現(xiàn)對β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類抗菌藥物同時耐藥的多重耐藥菌株的流行。對大腸桿菌中新出現(xiàn)的耐藥機制進(jìn)行研究有利于進(jìn)一步了解耐藥的分子機理，指導(dǎo)臨床用藥。
　　 ⑴大腸桿菌氨基糖苷類耐藥表型及基因型分析。采用K-B紙片法對224株大腸桿菌進(jìn)行5種氨基糖苷類藥物的藥敏試驗，采用微量肉湯稀釋法進(jìn)行慶

2、大霉素和阿米卡星最低抑菌濃度（MIC）的測定，三重PCR法檢測全部菌株氨基糖苷類鈍化酶基因ant(3″)-Ia、aac(6′)-Ib和aph(3′)-Iia，普通PCR法檢測16S甲基化酶基因。結(jié)果表明，山東省禽源大腸桿菌對鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐藥率分別為84.4％、57.1％、55.8％、46.9％和40.2％。三種鈍化酶基因ant(3″)-Ia、aac(6′)-Ib、aph(3′)-Iia的檢出率依次為49

3、.6％、25.0％、22.8％，介導(dǎo)高水平耐藥的16S甲基化酶基因RmtB的檢出率為11.6％（26/224），只有一株大腸桿菌檢測到armA基因，沒有檢測到rmtA，且三種甲基化酶基因在低度耐藥菌中檢出率均為0。所檢大腸桿菌中攜帶2種及2種以上耐藥基因的菌株占33.5％（75/224），有一株大腸桿菌同時攜帶4種耐藥基因。本研究結(jié)果表明氨基糖苷類鈍化酶及16S甲基化酶廣泛存在于禽源大腸桿菌菌中，其耐藥性與相關(guān)耐藥基因的檢出率基本呈正相

4、關(guān)。
　　 ⑵氨基糖苷類耐藥質(zhì)粒的鑒定及其攜帶率的檢測。根據(jù)試驗一的結(jié)果，選取大腸桿菌XZDC株（其MIC阿米卡星>1280μg/ml，MIC慶大霉素=512μg/ml），采用堿裂解法提取質(zhì)粒，并將提取的質(zhì)粒連續(xù)轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α三次，以保證其穩(wěn)定遺傳，將此質(zhì)粒命名為pXZ，然后進(jìn)行測序分析。為了解pXZ在大腸桿菌中的流行情況，建立三重PCR方法檢測其攜帶率。結(jié)果表明，pXZ為全長76,635bp、G+C％為51.65％的環(huán)狀

5、分子，GenBank的登錄號為JF927996，由62kb的骨架區(qū)和14kb的耐藥決定區(qū)構(gòu)成，耐藥決定區(qū)含有4個耐藥基因，分別為rmtB、fosA3、blaTEM-1和blaCTX-M-24，能夠介導(dǎo)氨基糖苷類、磷霉素和β-內(nèi)酰胺類的多重耐藥。三重PCR的檢出率為17/224，占rmtB陽性的高度耐藥菌株（阿米卡星和慶大霉素任一MIC≧512μg/ml）的64.5％（17/26），表明類pXZ質(zhì)粒主要介導(dǎo)高濃度耐藥。
　　 ⑶C

6、TX-M-9組編碼基因DNA序列測定與及基因型的確定。根據(jù)同源性不同，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases，ESBLs)基因CTX-M分為五組：CTX-M-1組、CTX-M-2組、CTX-M-8組、CTX-M-9組和CTX-M-25組，每組又分為許多不同的基因亞型。pXZ攜帶blaCTX-M-24基因，屬于CTX-M-9組。為確定試驗二中三重PCR檢測為類pXZ陽性的17株大腸桿菌中C