MAP3K3介導(dǎo)NF-κB信號通路對卵巢癌生物學(xué)行為影響的初步研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　第一部分 MAP3K3在卵巢癌組織中的表達及臨床意義研究
　　目的：探討MAP3K3在卵巢癌組織中的表達及臨床意義。
　　方法：采用免疫組化染色和熒光實時定量PCR的方法檢測93例卵巢癌和33例輸卵管組織中 MAP3K3的表達情況，并分析其與卵巢癌臨床病理因子的相關(guān)性以及預(yù)后的關(guān)系，探討MAP3K3是否可以作為卵巢癌復(fù)發(fā)和預(yù)后判讀的參考指標(biāo)。
　　結(jié)果：（1）MAP3K3蛋白表

2、達主要位于細胞漿內(nèi)，在卵巢癌和輸卵管組織中均有表達，高表達率分別為59.1％（55/93）和30.3%（10/33），但在卵巢癌組織中的表達顯著高于正常輸卵管組織（p<0.05）；（2）MAP3K3 mRNA在卵巢癌組織中的表達豐度顯著高于正常輸卵管組織（p<0.01）；（3）MAP3K3蛋白高表達與卵巢癌組織學(xué)類型（p=0.001），組織學(xué)級別（p=0.018），疾病發(fā)病模式（(p=0.000）以及化療反應(yīng)（p=0.009）密切相關(guān)，

3、與年齡（p=0.434），F(xiàn)IGO分期（p=0.491）以及腹水（p=0.988）等臨床病理參數(shù)沒有統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）；（4）應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線分析發(fā)現(xiàn)高表達MAP3K3蛋白的卵巢癌患者無瘤生存期和總體生存期明顯低于MAP3K3低表達患者（log-rank test, p=0.007和 p=0.001）；用Cox回歸模型進行卵巢癌預(yù)后因素篩選發(fā)現(xiàn)，在包括年齡、組織學(xué)類型、組織學(xué)級別、發(fā)病模式、化療反應(yīng)、FIGO

4、分期和腹水的多因素分析中，MAP3K3蛋白表達（HR：2.082，95%CI=1.154-3.756， p=0.015）與年齡（HR：4.127，95%CI=1.178-14.461，p=0.027）、化療反應(yīng)（HR：3.299，95%CI=1.473-7.387，p=0.004）以及FIGO分期（HR：2.038，95%CI=1.083-3.834， p=0.026）一樣，是影響OC患者預(yù)后的獨立危險因素。
　　結(jié)論：（1）MA

5、P3K3蛋白和mRNA在卵巢癌組織中高表達，且MAP3K3蛋白高表達與卵巢癌的組織學(xué)分級、發(fā)病模式、化療反應(yīng)等臨床病理因子相關(guān)；（2）MAP3K3蛋白高表達的卵巢癌患者的無瘤生存期和總體生存期顯著降低，是卵巢癌患者預(yù)后差的獨立危險因素。
　　第二部分 MAP3K3介導(dǎo)NF-κB信號通路對卵巢癌生物學(xué)行為的影響
　　目的：探討MAP3K3對卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響和可能介導(dǎo)的信號通路以及下游調(diào)控分子，

6、為進一步闡明MAP3K3基因影響卵巢癌惡性生物學(xué)行為的分子機制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：；采用Western Blot、熒光實時定量PCR和免疫熒光的方法檢測6株卵巢癌細胞中MAP3K3的表達水平，分別用MAP3K3真核表達載體和MAP3K3特異性干擾表達載體轉(zhuǎn)染內(nèi)源性低表達和/或高表達MAP3K3的卵巢癌細胞系，構(gòu)建MAP3K3穩(wěn)定敲低細胞系和過表達細胞系；通過使用NF-κB信號通路特異性阻斷劑QNZ和運用熒光素酶報告基因?qū)嶒?，觀察

7、處理前后NF-κB信號通路關(guān)鍵因子和EMT相關(guān)因子表達的變化情況，采用運用 CCK-8方法檢測干擾前后卵巢癌細胞增殖情況，克隆形成實驗檢測干擾前后細胞克隆形成情況，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，劃痕實驗和Transwell小室實驗檢測遷移和侵襲，免疫熒光檢測 EMT相關(guān)蛋白表達和細胞骨架蛋白表達的變化情況。
　　結(jié)果：（1）在六株卵巢癌細胞中，MAP3K3的蛋白和mRNA在SKOV3、C13*和A2780中相對高表達，在HeyA8、OV

8、CA433和OV2008中相對低表達。（2）MAP3K3表達下調(diào)能夠阻抑TNF-α對NF-κB信號通路的激活效應(yīng)，敲低MAP3K3后，NF-κB信號通路活性下降，間葉標(biāo)記物N-cadherin、Vimentin和ICAM1的表達下調(diào)，上皮標(biāo)記物E-cadherin表達上調(diào)，過表達MAP3K3后，上述現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)。（3）細胞內(nèi)功能實驗表明，敲低MAP3K3的表達能在體外抑制卵巢癌細胞增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力，并導(dǎo)致細胞自發(fā)凋亡增多，而過