飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術后急性腎損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：研究飽和氫氣生理鹽水對大鼠原位肝移植術后急性腎損傷的保護作用，并進一步探討自噬參與其腎臟保護效應的分子機制。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠56只，周齡8~10周，體重220~250 g，采取隨機數字表法隨機分為4組（n=8）：假手術組、大鼠原位肝移植模型組（OLT組）、飽和氫氣生理鹽水處理組（HS組）及氯喹預處理組（CQ組），其中假手術組8只，其它三組均為8對。假手術組行單純開關腹操作，并游離相應血管和肝周韌帶；大鼠原位肝

2、移植模型組建立大鼠原位肝移植模型，并于無肝期前5 min經下腔靜脈緩慢注射生理鹽水6 ml/kg；飽和氫氣生理鹽水處理組于無肝期前5 min經下腔靜脈緩慢注射飽和氫氣生理鹽水6 ml/kg，其它操作同大鼠原位肝移植模型組；氯喹預處理組于模型建立前1 h經腹腔注射自噬特異性抑制劑氯喹60 mg/kg，其它處理同飽和氫氣生理鹽水處理組。再灌注后6 h抽取靜脈血樣和腎組織檢測血清學和組織學指標，通過檢測血清尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）水平評

3、價腎功能情況，測定腎組織丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性評價腎臟氧化應激程度，通過伊紅-美藍（HE）染色于光學顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)學改變，并行腎小管損傷評分；采用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記（TUNEL）染色法定量檢測腎小管上皮細胞凋亡情況，計算凋亡指數；采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測活化的caspase-3、細胞色素c（Cyt c）等凋亡相關mRNA的表達水平；通過蛋白免疫印跡法（west

4、ern blot）檢測磷酸化 p53（p-53）、微管相關蛋白輕鏈3Ⅱ（LC3Ⅱ）、Beclin-1、活化的caspase-3和細胞色素c（Cyt c）等自噬及凋亡相關蛋白的表達水平；并且通過透射電子顯微鏡觀察自噬小體和自噬溶酶體的形成情況以及腎小管上皮細胞超微結構改變。
　　結果：與假手術組比較，OLT組腎功能顯著降低，腎小管上皮細胞出現(xiàn)空泡及管型，腎小管損傷評分增加，腎臟氧化應激水平升高，細胞凋亡明顯增加，凋亡指數升高，活化的

5、caspase-3和Cyt c的表達水平顯著上調，p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達水平差異無統(tǒng)計學意義；與OLT組比較，HS組大鼠腎功能明顯改善，腎組織空泡樣改變減少，腎小管損傷評分降低，腎臟氧化應激損傷減輕，細胞凋亡明顯減少，凋亡指數降低，并且活化的caspase-3和Cyt c的表達水平顯著降低，與此同時，p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達明顯上調，透射電鏡下可見自噬小體和自噬溶酶體的形成增加；與HS組比較

6、，CQ組大鼠腎功能降低，腎組織病理學損傷嚴重，腎小管損傷評分和凋亡指數升高，腎臟氧化應激水平升高，細胞凋亡增加，活化的caspase-3和Cyt c的表達水平上調， LC3Ⅱ及Beclin-1的表達下調，p53磷酸化的表達水平差異無統(tǒng)計學意義，應用氯喹抑制自噬后部分抵消了飽和氫氣生理鹽水的腎臟保護效應。
　　結論：飽和氫氣生理鹽水可通過調控p53磷酸化的表達，誘導細胞自噬的激活，并且自噬激活通過抑制腎小管上皮細胞凋亡、減輕腎臟氧化