表沒食子兒茶素沒食子酸酯對脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運體-1及糖酵解關(guān)鍵酶的影響.pdf

1、炎癥是一種免疫系統(tǒng)為中和病理狀態(tài)的正常生理反應，然而，失衡或者過長的炎癥反應將導致組織的進一步損傷，并且炎癥也與多種慢性疾病的發(fā)展有所聯(lián)系。在炎癥反應過程中，參與促炎反應的巨噬細胞是M1型，當巨噬細胞向M1型分化時，細胞發(fā)生一系列炎癥反應，包括NF-κB等信號通路的激活、多種促炎因子的分泌（IL-1β等）、ROS產(chǎn)物的生成以及細胞糖代謝的重編程。M1巨噬細胞發(fā)生代謝重編程，使得細胞TCA循環(huán)受抑制，糖氧酵解增強，并成為細胞能量的主要來源

2、，同時糖酵解所產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物成為合成炎性因子的物質(zhì)來源之一。
　　EGCG是綠茶中主要的多酚類物質(zhì)，也是其中主要的活性物質(zhì)，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤生成和抗氧化的活性，也具有抑制氧化對器官損傷的功能。EGCG在細胞表面表面受體為67 LR，通過67LR，EGCG可作用于細胞多種生理功能，包括細胞信號通路以及促炎因子的分泌等。
　　為探討EGCG對M1巨噬細胞葡萄糖攝取和糖酵解的影響，本實驗采用LPS誘導的小鼠巨噬細胞為炎

3、癥模型進行研究。細胞采用小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞系和小鼠骨髓細胞，并將小鼠骨髓細胞誘導為小鼠骨髓細胞衍生的巨噬細胞(bone marrow derivedmacrophage，BMDM)。實驗選取巨噬細胞主要的葡萄糖轉(zhuǎn)運體1(Glucose transporter1，GLUT1)，糖酵解關(guān)鍵酶己糖激酶2(hexokinase2，HK2)、u型-2，6-二磷酸果糖激酶2(u-6-phosphofructo-2-kinase，u-P

4、FK2)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase，Pkm)進行檢測。根據(jù)本課題組之前采用EGCG處理RAW264.7細胞炎癥相關(guān)研究，采用EGCG預處理2h，處理濃度為12.5μM，設(shè)立空白對照組、EGCG預處理組、LPS處理組和LPS+EGCG處理組，然后再用LPS(100ng/mL)處理24h后取材檢測。用實時熒光定量PCR檢測GLUT1、HK2、u-PFK2和Pkm的mRNA水平，葡萄糖濃度測定細胞培養(yǎng)液濃度，酶活測定檢測HK