表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對恥垢分枝桿菌的抑菌作用.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，M.TB）屬于分枝桿菌屬，是結(jié)核病的病原菌。其細(xì)胞壁厚而硬，并且具有疏水性，能夠有效地保護(hù)細(xì)菌，因此抗菌藥物的研發(fā)具有很高的難度。細(xì)胞壁是結(jié)核分枝桿菌賴以生存的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，其核心結(jié)構(gòu)為mAGP(Mycolicacid-Arabinogalactan-Peptidoglycan)，主要由分枝菌酸(Mycolicacid)、聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan，AG)

2、以及肽聚糖(Peptidoglycan)三部分共價連接組成。其中聚阿拉伯半乳糖是連接肽聚糖和分枝菌酸、維持分枝桿菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)完整性的重要組分，在細(xì)胞壁中含量較高，因此目前人們將聚阿拉伯半乳糖作為研發(fā)新一代抗結(jié)核藥物的理想靶標(biāo)。
　　 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是從綠茶中分離得到的兒茶素類單體物質(zhì)，是茶多酚生物活性的最主要成份。它具有抗氧化、抗腫瘤、抗突變、抗衰老和抑

3、菌等多種生物功能，是近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。EGCG對具有特殊細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、普通藥物很難到達(dá)作用靶點(diǎn)的結(jié)核分枝桿菌作用如何，至今國內(nèi)外未見報道。本研究采用與結(jié)核分枝桿菌具有相似遺傳學(xué)特性、生長快速、但無傳染性的恥垢分枝桿菌(M.smegmatismc2155)作為模式菌來研究EGCG的抑菌機(jī)制。
　　 目的:
　　 1.從普通綠茶中提取綠茶粗提物;
　　 2.研究綠茶粗提物對恥垢分枝桿菌的抑菌作用;
　　

4、 3.研究EGCG對恥垢分枝桿菌的抑菌作用;
　　 4.通過研究綠茶粗提物及EGCG對恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan，AG)代謝的影響，進(jìn)一步探討EGCG對恥垢分枝桿菌的抑菌機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.采用乙酸乙酯在中性條件下萃取綠茶，得到含有EGCG的粗提物;高效液相色譜法(HPLC)檢測綠茶粗提物中的EGCG含量。
　　 2.利用紙片瓊脂擴(kuò)散法研究不同濃度綠茶粗

5、提物對恥垢分枝桿菌的抑菌效果;利用酶標(biāo)儀測定綠茶粗提物的最低抑菌濃度(MIC值)。
　　 3.利用抑菌圈實(shí)驗(yàn)研究EGCG對恥垢分枝桿菌的抑制作用;應(yīng)用透射電子顯微鏡(Transmissionelectronmicroscopy，TEM)觀察其對恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及形態(tài)的影響。
　　 4.提取恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁聚阿拉伯糖半乳糖(AG);并通過薄板層析法來測定經(jīng)EGCG及綠茶粗提物作用后的恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁中聚阿拉伯半乳

6、糖含量的變化，研究EGCG對恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁AG代謝的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.HPLC結(jié)果顯示成功提取了富含EGCG的綠茶粗提物。
　　 2.紙片瓊脂擴(kuò)散法證明了綠茶粗提物對恥垢分枝桿菌具有明顯的抑制作用，應(yīng)用酶標(biāo)儀測定了其最小抑菌濃度。
　　 3.抑菌圈實(shí)驗(yàn)證明了EGCG對恥垢分枝桿菌具有明顯的抑制作用，透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)EGCG處理后菌體細(xì)胞壁會發(fā)生扭曲變形等現(xiàn)象。
　　 4.薄板層

7、析法證實(shí)綠茶粗提物處理后恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁AG代謝會產(chǎn)生明顯變化。
　　 結(jié)論:(1)EGCG能明顯抑制恥垢分枝桿菌的生長;(2)EGCG能影響菌體細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及形態(tài)的穩(wěn)定;(3)綠茶粗提物能影響分枝桿菌細(xì)胞壁中聚阿拉伯半乳糖的代謝。推測EGCG很可能是通過影響恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁AG代謝，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的完整性，發(fā)揮其抑菌效應(yīng)。
　　 未來研究方向:(1)深度研究EGCG對恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁AG代謝的影響，用HPLC對AG