表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對恥垢分枝桿菌的抑菌作用.pdf

1、結核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，M.TB）屬于分枝桿菌屬，是結核病的病原菌。其細胞壁厚而硬，并且具有疏水性，能夠有效地保護細菌，因此抗菌藥物的研發(fā)具有很高的難度。細胞壁是結核分枝桿菌賴以生存的結構基礎，其核心結構為mAGP(Mycolicacid-Arabinogalactan-Peptidoglycan)，主要由分枝菌酸(Mycolicacid)、聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan，AG)

2、以及肽聚糖(Peptidoglycan)三部分共價連接組成。其中聚阿拉伯半乳糖是連接肽聚糖和分枝菌酸、維持分枝桿菌細胞壁結構完整性的重要組分，在細胞壁中含量較高，因此目前人們將聚阿拉伯半乳糖作為研發(fā)新一代抗結核藥物的理想靶標。
　　 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是從綠茶中分離得到的兒茶素類單體物質，是茶多酚生物活性的最主要成份。它具有抗氧化、抗腫瘤、抗突變、抗衰老和抑

3、菌等多種生物功能，是近年來國內外研究的熱點之一。EGCG對具有特殊細胞壁結構、普通藥物很難到達作用靶點的結核分枝桿菌作用如何，至今國內外未見報道。本研究采用與結核分枝桿菌具有相似遺傳學特性、生長快速、但無傳染性的恥垢分枝桿菌(M.smegmatismc2155)作為模式菌來研究EGCG的抑菌機制。
　　 目的:
　　 1.從普通綠茶中提取綠茶粗提物;
　　 2.研究綠茶粗提物對恥垢分枝桿菌的抑菌作用;
　　

4、 3.研究EGCG對恥垢分枝桿菌的抑菌作用;
　　 4.通過研究綠茶粗提物及EGCG對恥垢分枝桿菌細胞壁聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan，AG)代謝的影響，進一步探討EGCG對恥垢分枝桿菌的抑菌機制。
　　 方法:
　　 1.采用乙酸乙酯在中性條件下萃取綠茶，得到含有EGCG的粗提物;高效液相色譜法(HPLC)檢測綠茶粗提物中的EGCG含量。
　　 2.利用紙片瓊脂擴散法研究不同濃度綠茶粗

5、提物對恥垢分枝桿菌的抑菌效果;利用酶標儀測定綠茶粗提物的最低抑菌濃度(MIC值)。
　　 3.利用抑菌圈實驗研究EGCG對恥垢分枝桿菌的抑制作用;應用透射電子顯微鏡(Transmissionelectronmicroscopy，TEM)觀察其對恥垢分枝桿菌細胞壁結構及形態(tài)的影響。
　　 4.提取恥垢分枝桿菌細胞壁聚阿拉伯糖半乳糖(AG);并通過薄板層析法來測定經(jīng)EGCG及綠茶粗提物作用后的恥垢分枝桿菌細胞壁中聚阿拉伯半乳

6、糖含量的變化，研究EGCG對恥垢分枝桿菌細胞壁AG代謝的影響。
　　 結果:
　　 1.HPLC結果顯示成功提取了富含EGCG的綠茶粗提物。
　　 2.紙片瓊脂擴散法證明了綠茶粗提物對恥垢分枝桿菌具有明顯的抑制作用，應用酶標儀測定了其最小抑菌濃度。
　　 3.抑菌圈實驗證明了EGCG對恥垢分枝桿菌具有明顯的抑制作用，透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)EGCG處理后菌體細胞壁會發(fā)生扭曲變形等現(xiàn)象。
　　 4.薄板層

7、析法證實綠茶粗提物處理后恥垢分枝桿菌細胞壁AG代謝會產(chǎn)生明顯變化。
　　 結論:(1)EGCG能明顯抑制恥垢分枝桿菌的生長;(2)EGCG能影響菌體細胞壁結構及形態(tài)的穩(wěn)定;(3)綠茶粗提物能影響分枝桿菌細胞壁中聚阿拉伯半乳糖的代謝。推測EGCG很可能是通過影響恥垢分枝桿菌細胞壁AG代謝，破壞細胞壁結構的完整性，發(fā)揮其抑菌效應。
　　 未來研究方向:(1)深度研究EGCG對恥垢分枝桿菌細胞壁AG代謝的影響，用HPLC對AG