表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯用于小細(xì)胞肺癌的基礎(chǔ)及臨床研究.pdf

1、研究背景和研究目的:
　　 肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,已成為人類(lèi)死亡的主要原因。小細(xì)胞肺癌(SCLC)發(fā)病率占全部肺癌的16％。一般來(lái)說(shuō),與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)相比,小細(xì)胞肺癌倍增時(shí)間短,生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)高,易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。盡管SCLC的一線治療效果很明顯,但復(fù)發(fā)率高,遠(yuǎn)期生存時(shí)間不長(zhǎng)。
　　 維持治療在小細(xì)胞肺癌領(lǐng)域報(bào)道較少,2010年美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)(ASCO)年會(huì)上公布了一項(xiàng)來(lái)自美國(guó)的Ⅱ期臨床試驗(yàn),評(píng)價(jià)廣泛期SCL

2、C一線伊立替康+卡鉑(IC)方案治療后應(yīng)用舒尼替尼維持治療的療效和安全性,對(duì)一線IC方案治療后沒(méi)有進(jìn)展及不可耐受毒性的患者給予舒尼替尼口服直至病情進(jìn)展。共34例患者納入試驗(yàn),中位至疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)為7.6個(gè)月,6個(gè)月的總生存為91％,接受舒尼替尼治療的4例患者未發(fā)生3/4級(jí)毒性,目前該項(xiàng)試驗(yàn)仍在隨訪中。
　　 表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是綠茶中含量最多的兒茶素,其抗腫瘤的作用機(jī)制包括誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖以及

3、抑制腫瘤血管生成等,體外實(shí)驗(yàn)已證明EGCG對(duì)多種腫瘤均有療效。當(dāng)前EGCG抗腫瘤作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)正在國(guó)內(nèi)外很多實(shí)驗(yàn)室逐漸展開(kāi)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面,很多研究結(jié)果證實(shí),針對(duì)不同組織,如肺、胃、結(jié)腸、肝、皮膚等,EGCG處理組動(dòng)物的腫瘤發(fā)生率和復(fù)發(fā)率比對(duì)照組明顯降低。
　　 SCLC一線治療后復(fù)發(fā)率高,且對(duì)于早期復(fù)發(fā)的患者尚缺乏標(biāo)準(zhǔn)的二線治療藥物,在一線和二線治療之間選擇毒性較低的化療藥物或靶向藥物維持,以進(jìn)一步延長(zhǎng)生存期,是值得研

4、究和探索的領(lǐng)域。
　　 研究?jī)?nèi)容:
　　 1.鑒定EGCG對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H446的生長(zhǎng)抑制作用。
　　 2.鑒定EGCG單獨(dú)使用及聯(lián)合順鉑對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H446細(xì)胞周期的影響
　　 3.鑒定EGCG單獨(dú)使用及聯(lián)合順鉑對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H446凋亡的影響
　　 4.在一線治療獲益的廣泛期小細(xì)胞肺癌患者中進(jìn)行Ⅰ期臨床試驗(yàn),主要考察其安全性并初步考察其潛在的治療作用
　　 研究方法:

5、r>　　 1.細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè):
　　 1.1.MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,由此對(duì)EGCG進(jìn)行初步篩選;
　　 1.2.選擇目前臨床上常用抗腫瘤藥物順鉑為對(duì)照藥物,用MTT法檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況,并與EGCG做比較。
　　 2.細(xì)胞周期檢測(cè)
　　 流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)單純應(yīng)用EGCG、順鉑及二者聯(lián)合使用時(shí)對(duì)H446細(xì)胞周期的影響。
　　 3.細(xì)胞凋亡檢測(cè)
　　 流式細(xì)胞儀分

6、別檢測(cè)單純應(yīng)用EGCG、順鉑及二者聯(lián)合使用時(shí)對(duì)H446細(xì)胞早期凋亡的影響。
　　 4.采用傳統(tǒng)3+3設(shè)計(jì),改良的Fibonacci劑量遞升方法在一線治療獲益的小細(xì)胞肺癌患者中進(jìn)行EGCG維持治療的Ⅰ期臨床試驗(yàn)
　　 研究結(jié)果:
　　 1.EGCG的抗腫瘤活性
　　 應(yīng)用不同濃度的EGCG處理H446細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后可見(jiàn)存活率均隨EGCG濃度的增大和時(shí)間的增加而降低,具有濃度依賴性及時(shí)間依

7、賴性。EGCG處理24h、48h、72h的IC50分別為254umol/1、160umol/1、114umol/1。應(yīng)用不同濃度的DDP處理H446細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后可見(jiàn)存活率均隨DDP濃度的增大和時(shí)間的增加而降低,具有濃度依賴性及時(shí)間依賴性。DDP處理24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的IC50分別為3ug/ml、1.98ug/ml、1.32ug/ml。
　　 2.不同處理方法H446細(xì)胞周期的變化
　　 8

8、0umol/1和160umol/1EGCG分別聯(lián)合1ug/ml的DDP處理H446細(xì)胞48小時(shí),與對(duì)照組比較,單純應(yīng)用EGCG時(shí)細(xì)胞周期未發(fā)生明顯變化,單純應(yīng)用1ug/ml的DDP時(shí),可見(jiàn)G2/M期阻滯。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1的EGCG引起的G2/M期阻滯更加明顯(p＜0.05)。
　　 3.不同方法處理H446細(xì)胞凋亡的變化
　　 80umol/1和160umol/1EGCG分別聯(lián)

9、合1ug/ml的DDP處理H446細(xì)胞48小時(shí),與對(duì)照組比較,單純應(yīng)用EGCG時(shí),早期凋亡明顯增加,并具有濃度依賴性。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1和160umol/1的EGCG引起的早期凋亡更加明顯。
　　 4.臨床試驗(yàn)
　　 4.1.安全性:在入組的11例患者中,目前尚未發(fā)現(xiàn)≥2級(jí)經(jīng)對(duì)癥處理不能逆轉(zhuǎn)的不良反應(yīng),也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)于轉(zhuǎn)氨酶(AST&ALT)升高。
　　 4.2.潛在的治療

10、作用:目前僅有5例患者隨訪到無(wú)進(jìn)展生存期,并且即使出現(xiàn)進(jìn)展的患者目前尚無(wú)死亡的病例,無(wú)法獲知中位無(wú)進(jìn)展生存期及總生存期,無(wú)法在此方面評(píng)價(jià)其潛在的作用。
　　 4.3.治療前后腫瘤標(biāo)志物的變化:神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)在用藥前后變化不顯著,基線NSE為20.18±7.19,用藥1月后NSE為19.96±8.31,p＞0.05;癌胚抗原(CEA)在用藥前后變化亦不顯著,基線CEA為3.33±1.44,用藥1月后CEA為3.51±1.

11、56,p＞0.05。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.體外試驗(yàn)中EGCG表現(xiàn)了較強(qiáng)的抗腫瘤活性,其24h、48h、72h的IC50分別為254umol/1、160umol/1、114umol/1。
　　 2.單獨(dú)應(yīng)用EGCG對(duì)H446細(xì)胞周期無(wú)影響,但可增強(qiáng)順鉑引起G2/M期阻滯。
　　 3.單純應(yīng)用EGCG時(shí),早期凋亡明顯增加,并具有濃度依賴性。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1和