表沒食子兒茶素沒食子酸酯用于小細胞肺癌的基礎(chǔ)及臨床研究.pdf

1、研究背景和研究目的:
　　 肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,已成為人類死亡的主要原因。小細胞肺癌(SCLC)發(fā)病率占全部肺癌的16％。一般來說,與非小細胞肺癌(NSCLC)相比,小細胞肺癌倍增時間短,生長分數(shù)高,易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。盡管SCLC的一線治療效果很明顯,但復(fù)發(fā)率高,遠期生存時間不長。
　　 維持治療在小細胞肺癌領(lǐng)域報道較少,2010年美國臨床腫瘤學(xué)會(ASCO)年會上公布了一項來自美國的Ⅱ期臨床試驗,評價廣泛期SCL

2、C一線伊立替康+卡鉑(IC)方案治療后應(yīng)用舒尼替尼維持治療的療效和安全性,對一線IC方案治療后沒有進展及不可耐受毒性的患者給予舒尼替尼口服直至病情進展。共34例患者納入試驗,中位至疾病進展時間(TTP)為7.6個月,6個月的總生存為91％,接受舒尼替尼治療的4例患者未發(fā)生3/4級毒性,目前該項試驗仍在隨訪中。
　　 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是綠茶中含量最多的兒茶素,其抗腫瘤的作用機制包括誘導(dǎo)細胞凋亡、抑制細胞增殖以及

3、抑制腫瘤血管生成等,體外實驗已證明EGCG對多種腫瘤均有療效。當前EGCG抗腫瘤作用的動物實驗和臨床試驗正在國內(nèi)外很多實驗室逐漸展開。動物實驗方面,很多研究結(jié)果證實,針對不同組織,如肺、胃、結(jié)腸、肝、皮膚等,EGCG處理組動物的腫瘤發(fā)生率和復(fù)發(fā)率比對照組明顯降低。
　　 SCLC一線治療后復(fù)發(fā)率高,且對于早期復(fù)發(fā)的患者尚缺乏標準的二線治療藥物,在一線和二線治療之間選擇毒性較低的化療藥物或靶向藥物維持,以進一步延長生存期,是值得研

4、究和探索的領(lǐng)域。
　　 研究內(nèi)容:
　　 1.鑒定EGCG對小細胞肺癌細胞株H446的生長抑制作用。
　　 2.鑒定EGCG單獨使用及聯(lián)合順鉑對小細胞肺癌細胞株H446細胞周期的影響
　　 3.鑒定EGCG單獨使用及聯(lián)合順鉑對小細胞肺癌細胞株H446凋亡的影響
　　 4.在一線治療獲益的廣泛期小細胞肺癌患者中進行Ⅰ期臨床試驗,主要考察其安全性并初步考察其潛在的治療作用
　　 研究方法:

5、r>　　 1.細胞生長抑制檢測:
　　 1.1.MTT法檢測細胞存活率,由此對EGCG進行初步篩選;
　　 1.2.選擇目前臨床上常用抗腫瘤藥物順鉑為對照藥物,用MTT法檢測其對腫瘤細胞和正常細胞的生長抑制情況,并與EGCG做比較。
　　 2.細胞周期檢測
　　 流式細胞儀分別檢測單純應(yīng)用EGCG、順鉑及二者聯(lián)合使用時對H446細胞周期的影響。
　　 3.細胞凋亡檢測
　　 流式細胞儀分

6、別檢測單純應(yīng)用EGCG、順鉑及二者聯(lián)合使用時對H446細胞早期凋亡的影響。
　　 4.采用傳統(tǒng)3+3設(shè)計,改良的Fibonacci劑量遞升方法在一線治療獲益的小細胞肺癌患者中進行EGCG維持治療的Ⅰ期臨床試驗
　　 研究結(jié)果:
　　 1.EGCG的抗腫瘤活性
　　 應(yīng)用不同濃度的EGCG處理H446細胞24小時、48小時、72小時后可見存活率均隨EGCG濃度的增大和時間的增加而降低,具有濃度依賴性及時間依

7、賴性。EGCG處理24h、48h、72h的IC50分別為254umol/1、160umol/1、114umol/1。應(yīng)用不同濃度的DDP處理H446細胞24小時、48小時、72小時后可見存活率均隨DDP濃度的增大和時間的增加而降低,具有濃度依賴性及時間依賴性。DDP處理24小時、48小時、72小時的IC50分別為3ug/ml、1.98ug/ml、1.32ug/ml。
　　 2.不同處理方法H446細胞周期的變化
　　 8

8、0umol/1和160umol/1EGCG分別聯(lián)合1ug/ml的DDP處理H446細胞48小時,與對照組比較,單純應(yīng)用EGCG時細胞周期未發(fā)生明顯變化,單純應(yīng)用1ug/ml的DDP時,可見G2/M期阻滯。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1的EGCG引起的G2/M期阻滯更加明顯(p＜0.05)。
　　 3.不同方法處理H446細胞凋亡的變化
　　 80umol/1和160umol/1EGCG分別聯(lián)

9、合1ug/ml的DDP處理H446細胞48小時,與對照組比較,單純應(yīng)用EGCG時,早期凋亡明顯增加,并具有濃度依賴性。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1和160umol/1的EGCG引起的早期凋亡更加明顯。
　　 4.臨床試驗
　　 4.1.安全性:在入組的11例患者中,目前尚未發(fā)現(xiàn)≥2級經(jīng)對癥處理不能逆轉(zhuǎn)的不良反應(yīng),也沒有發(fā)現(xiàn)對于轉(zhuǎn)氨酶(AST&ALT)升高。
　　 4.2.潛在的治療

10、作用:目前僅有5例患者隨訪到無進展生存期,并且即使出現(xiàn)進展的患者目前尚無死亡的病例,無法獲知中位無進展生存期及總生存期,無法在此方面評價其潛在的作用。
　　 4.3.治療前后腫瘤標志物的變化:神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)在用藥前后變化不顯著,基線NSE為20.18±7.19,用藥1月后NSE為19.96±8.31,p＞0.05;癌胚抗原(CEA)在用藥前后變化亦不顯著,基線CEA為3.33±1.44,用藥1月后CEA為3.51±1.

11、56,p＞0.05。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.體外試驗中EGCG表現(xiàn)了較強的抗腫瘤活性,其24h、48h、72h的IC50分別為254umol/1、160umol/1、114umol/1。
　　 2.單獨應(yīng)用EGCG對H446細胞周期無影響,但可增強順鉑引起G2/M期阻滯。
　　 3.單純應(yīng)用EGCG時,早期凋亡明顯增加,并具有濃度依賴性。與單純應(yīng)用1ug/ml的DDP比較,聯(lián)合應(yīng)用80umol/1和