炎癥調(diào)控PCSK9介導(dǎo)的阿霉素腎病小鼠腎臟脂質(zhì)沉積的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:小鼠阿霉素腎病模型和慢性炎癥模型的建立
　　目的:復(fù)制小鼠阿霉素腎病模型和慢性炎癥模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定研究基礎(chǔ)。
　　方法:根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)隨機(jī)數(shù)字表，將6周齡雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為對照組(CTL)、單純腎病組(ADR)、單純炎癥組(IFM)和炎癥腎病組(AWI)。給予ADR組和AWI組尾靜脈注射阿霉素10.5mg/kg，建立阿霉素腎病模型;CTL組給予等量的注射用生理鹽水;IFM組和AWI組隔日皮下注射0.5ml

2、10％酪蛋白，建立慢性炎癥模型。各實(shí)驗(yàn)小組分別于實(shí)驗(yàn)開始后第4、8、12周末處死小鼠、獲取標(biāo)本，每組每個時間點(diǎn)8個樣本?？捡R斯亮藍(lán)法檢測小鼠24h尿蛋白水平;全自動生化分析儀檢測血清白蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白、肌酐水平;通過HE染色和PAS染色在光鏡下觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變;
　　結(jié)果:單純腎病組和炎癥腎病組在注射阿霉素后第2周出現(xiàn)大量蛋白尿，第8周達(dá)到高峰，持續(xù)至第12周(P＜0.05);炎癥組在第6周出現(xiàn)蛋白尿，但水平明顯低于

3、炎癥腎病組(P＜0.05)。單純腎病組和炎癥腎病組第4周出現(xiàn)血白蛋白降低(P＜0.05);兩組分別在第8、4周出現(xiàn)血脂增高，第12、8周出現(xiàn)血肌酐增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。單純炎癥組腎臟第4、8、12周光鏡下均可見炎癥細(xì)胞浸潤，不伴其他病理改變;單純腎病組和炎癥腎病組腎臟早期病理類型為微小病變型，兩者分別在第12、8周出現(xiàn)局灶節(jié)段性腎小球硬化，伴腎功能不全。
　　結(jié)論:阿霉素腎病小鼠模型和慢性炎癥模型復(fù)制成功。阿霉素

4、小鼠腎病模型早期病理改變?yōu)槲⑿〔∽?，隨著病程遷延，出現(xiàn)局灶節(jié)段性腎小球硬化，伴腎功能不全。炎癥能夠加重腎病的發(fā)展。
　　第二部分:PCSK9在炎癥介導(dǎo)的阿霉素腎病小鼠腎臟脂質(zhì)沉積的作用研究
　　目的:探討炎癥在PCSK9介導(dǎo)的阿霉素腎病小鼠腎臟內(nèi)脂質(zhì)沉積的可能作用機(jī)制。
　　方法:采用油紅O法檢測腎臟脂質(zhì)沉積程度;酶比色法檢測腎臟總膽固醇的含量;real-time PCR技術(shù)檢測腎組織IL-1β、TGF-β1、HNF-

5、1α、SREBP-2、PCSK9、LDLr mRNA表達(dá);免疫組化技術(shù)檢測腎組織IL-1β、TGF-β1、HNF-1α、SREBP-2、PCSK9、LDLr的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:單純炎癥組、單純腎病組、炎癥腎病組的腎組織總膽固醇含量第4周開始呈進(jìn)行性升高，均高于對照組(P＜0.05);單純炎癥組、單純腎病組總膽固醇第8周開始均低于炎癥腎病組(P＜0.05)。單純炎癥組、單純腎病組和炎癥腎病組腎組織IL-1β、TGF-β1、SRE

6、BP-2、LDLr mRNA表達(dá)量第4、8、12周均高于正常組(P＜0.05)，HNF-1α、PCSK9表達(dá)量低于正常組(P＜0.05)。單純炎癥組、單純腎病組腎組織IL-1β、TGF-β1、SREBP-2、LDLr的蛋白表達(dá)量第8、12周低于炎癥腎病組(P＜0.05)，HNF-1α、PCSK9表達(dá)量高于炎癥腎病組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:小鼠阿霉素腎病腎臟炎癥程度隨時間延長逐步加重。阿霉素腎病模型中膽固醇含量隨炎癥程度的加重