慢性間歇缺氧誘導(dǎo)小鼠海馬損傷的神經(jīng)炎癥機(jī)制及藥物干預(yù)的研究.pdf

1、1.拮抗P2X7受體改善慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷、認(rèn)知受損的研究
　　目的：睡眠呼吸暫停綜合征可引起患者認(rèn)知障礙，但其具體機(jī)制尚不清楚。慢性間歇缺氧是睡眠呼吸暫停最重要的特征，此缺氧模型常用于對(duì)睡眠呼吸暫停綜合癥的研究。P2X7受體是一種常見于多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的嘌呤受體，在腦組織中廣泛表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)擬研究P2X7受體在慢性間歇缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)損傷中的作用及其可能的通路。
　　方法：實(shí)驗(yàn)使用8周齡C57BL/6小鼠。為探究P2X7

2、受體表達(dá)的變化，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)（第3,7,14,21天）采用8只小鼠，隨機(jī)分為缺氧組（氧濃度21％~6%，40循環(huán)/小時(shí)，一天8小時(shí)）和常氧組（氧濃度21%，其余條件一致）2組。使用蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)P2X7受體。之后在為期21天的BBG（P2X7受體拮抗劑）實(shí)驗(yàn)中，采用48只小鼠，隨機(jī)分為慢性間歇缺氧+生理鹽水組，慢性缺氧+BBG組，常氧+生理鹽水組，常氧+BBG組4組。使用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的認(rèn)知功能。使用

3、蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)NFκB和NOX2水平。使用實(shí)時(shí)定量熒光PCR測(cè)量腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-1β)，IL-18，IL-6的水平。使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)丙二醛和超氧化物歧化酶水平。用蘇木精-伊紅染色法和TUNEL染色法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞損傷和凋亡。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)P2X7受體mRNA于間歇缺氧3天后開始增高，持續(xù)到21天，P2X7受體蛋白水平于間歇缺氧第7天開始增高持續(xù)到21天。在BBG實(shí)驗(yàn)中，慢性間歇缺氧小鼠在

4、Morris水迷宮的表現(xiàn)差于其他組小鼠，表現(xiàn)為潛伏期更長，在平臺(tái)的穿越次數(shù)更少，目標(biāo)象限停留時(shí)間更少。BBG處理后認(rèn)知功能改善。慢性間歇小鼠中NFκB和NOX2升高，使用BBG后其水平下降。慢性間歇小鼠中TNF-α，IL-1β，IL-18，IL-6的水平均高于正常組。BBG處理CIH組炎癥因子的水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平均高于正常組。BBG可使MDA下降，SOD增高。慢性間歇缺氧小鼠的海馬神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，核聚縮等細(xì)胞退化

5、，細(xì)胞凋亡的改變,BBG使細(xì)胞受損改善。
　　結(jié)論：拮抗P2X7受體可以改善間歇缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激、神經(jīng)損害和空間認(rèn)知能力損傷，提示P2X7受體可能為睡眠呼吸暫停綜合征所致認(rèn)知缺損的新靶點(diǎn)，為今后藥物的研究提供更多的選擇。
　　2.阿托伐他汀對(duì)慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷及Toll樣受體4信號(hào)通路影響的研究
　　目的：海馬神經(jīng)損傷為睡眠呼吸暫停導(dǎo)致的認(rèn)知損害的重要原因。阿托伐他汀是一種廣泛使用的降脂藥物，有文獻(xiàn)報(bào)

6、導(dǎo)其能改善認(rèn)知損傷。TLR4受體是一種參與天然免疫的Toll受體，近期發(fā)現(xiàn)其在阿爾茨海默病等多種神經(jīng)疾病中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)擬研究阿托伐他汀是否能改善慢性間歇缺氧所致小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷，以及 TLR4及其下游通路是否參與其中。
　　方法：實(shí)驗(yàn)使用40只8周齡C57BL/6小鼠。小鼠隨機(jī)分為慢性間歇缺氧（氧濃度21%-6%，40循環(huán)/小時(shí)，一天8小時(shí)）組，慢性間歇缺氧+阿托伐他汀組，常氧組，常氧+阿托伐他汀組4組。使用蛋白質(zhì)印跡法和

7、實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)TLR4受體及其下游通路蛋白MYD88和TRIF。使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）檢測(cè)腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用蘇木精-伊紅染色法和TUNEL染色法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞損傷和凋亡。
　　結(jié)果：慢性間歇小鼠中TLR4受體，MYD88和TRIF水平升高，阿托伐他汀的使用降低TLR4受體及下游通路蛋白的表達(dá)。慢性間歇缺氧海馬和血清中TNF

8、-α，IL-1β水平均高于正常組，阿托伐他汀處理使炎癥因子水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平高于正常組。阿托伐他汀可使SOD增高，MDA下降。慢性間歇缺氧小鼠的海馬神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，核聚縮等細(xì)胞退化的改變，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加，阿托伐他汀使細(xì)胞受損改善。
　　結(jié)論：阿托伐他汀可以改善慢性間歇缺氧所致海馬神經(jīng)損傷，其作用可能涉及TLR4/MYD88和TLR4/TRIF通路。
　　3.鄰香草醛對(duì)慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷及TOL

9、L樣受體2信號(hào)通路影響的研究
　　目的：海馬神經(jīng)損傷為睡眠呼吸暫停導(dǎo)致認(rèn)知損害的主要原因。TLR2受體是一種在腦缺血等多種神經(jīng)疾病中發(fā)揮重要作用的I型受體，在OSAS患者中表達(dá)亦有增高。鄰香草醛為新近發(fā)現(xiàn)的TLR2通路抑制劑，且具有抗氧化等作用。本實(shí)驗(yàn)擬研究鄰香草醛是否能通過抑制TLR2通路改善慢性間歇缺氧所致小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞損傷。
　　方法：實(shí)驗(yàn)使用40只8周齡C57BL/6小鼠。小鼠隨機(jī)分為慢性間歇缺氧（氧濃度21%-6

10、%，40循環(huán)/小時(shí)，一天8小時(shí)）組，慢性間歇缺氧+鄰香草醛組，常氧組，常氧+鄰香草醛組4組。使用免疫共沉淀和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)TLR2受體與其下游通路蛋白MYD88相互作用，使用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)NFκB激活狀態(tài)。使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢（ELISA）測(cè)腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)，使用TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　

11、　結(jié)果：慢性間歇小鼠中 TLR2/MYD88通路被激活，鄰香草醛的使用抑制 TLR2通路激活及下游NFkB的表達(dá)。慢性間歇缺氧海馬和血清中TNF-α，IL-1β水平均高于正常組，鄰香草醛的處理使炎癥因子水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平高于正常組。鄰香草醛可使MDA下降，SOD增高。慢性間歇缺氧小鼠的海馬小膠質(zhì)細(xì)胞聚集增加，活化程度較高，神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，核聚縮等細(xì)胞退化的改變，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加，鄰香草醛可以減少小膠質(zhì)細(xì)胞的聚集，