PRRSV感染下調(diào)豬肺泡巨噬細胞清道夫受體A表達的機制研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的頭號元兇，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失?，F(xiàn)如今，雖然疫苗的使用使得PRRSV感染引發(fā)的爆發(fā)流行得以控制，但在臨床上PRRSV與細菌等微生物共感染的現(xiàn)象非常普遍。然而，到目前為止，其具體的機制還不清楚。
　　在肺部，豬肺泡巨噬細胞(porcine alveolar macro

2、phages，PAM)是PRRSV感染的靶細胞。已有的研究顯示，PRRSV感染可破壞PAM介導的先天性免疫防御包括對入侵病原菌的吞噬。巨噬細胞A類清道夫受體(Scavenger Receptor，SR)如SRA和MARCO，作為一類重要的先天性免疫受體，介導對多種病原菌的識別和吞噬，包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等。我們前期的研究顯示豬SRA和MARCO可以介導對臨床常見分離菌如金黃色葡萄球菌、副豬嗜血桿菌等的吞噬。進一步，我們的前期結(jié)果

3、顯示PRRSV感染下調(diào)SRA和MARCO在PAM上的表達(mRNA水平)。因此，這些結(jié)果促使我們假想:PRRSV感染可通過下調(diào)清道夫受體SRA和MARCO的表達抑制細菌的吞噬，從而促進細菌的繼發(fā)感染。本研究聚焦于PRRSV感染下調(diào)清道夫受體表達機制研究，具體如下:
　　首先，利用Western blot方法對豬不同組織中SRA和MARCO的表達情況進行了分析。在肺中，我們可以檢測到SRA和MARCO的表達。但在PAM上SRA有較高

4、水平的表達，MARCO的表達量較低，幾乎檢測不到其表達。
　　隨后，我們對PRRSV感染下調(diào)清道夫受體表達機制進行了研究。鑒于MARCO在PAMs細胞上低水平表達，因此，我們主要聚焦于PRRSV感染下調(diào)SRA表達的機制研究。具體的研究結(jié)果為:
　　1)我們收取PRRSV感染的PAM不同時間點的mRNA和蛋白樣品進行分析，結(jié)果顯示PRRSV感染可通過抑制轉(zhuǎn)錄下調(diào)SRA的表達。
　　2)利用UV滅活的病毒作為對照，我們的研

5、究顯示PRRSV感染下調(diào)SRA的表達與病毒復制相關。
　　3)我們克隆了豬的SRA的啟動子并構建表達蟲熒光素酶的報告質(zhì)粒，通過測定luciferase驗證SRA啟動子的有活性;進一步，通過缺失突變，鑒定出核心啟動子區(qū)域。利用雙熒光素酶報告基因檢測技術，篩選到PRRSV的非結(jié)構蛋白NSP4可以抑制SRA的熒光素酶活性。進一步，我們的研究發(fā)現(xiàn)NSP4主要抑制其核心啟動子的活性。
　　4)通過染色質(zhì)免疫共沉淀方法(CHIP)驗證N