PRRSV感染下調(diào)豬肺泡巨噬細(xì)胞清道夫受體A表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)元兇，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)如今，雖然疫苗的使用使得PRRSV感染引發(fā)的爆發(fā)流行得以控制，但在臨床上PRRSV與細(xì)菌等微生物共感染的現(xiàn)象非常普遍。然而，到目前為止，其具體的機(jī)制還不清楚。
　　在肺部，豬肺泡巨噬細(xì)胞(porcine alveolar macro

2、phages，PAM)是PRRSV感染的靶細(xì)胞。已有的研究顯示，PRRSV感染可破壞PAM介導(dǎo)的先天性免疫防御包括對入侵病原菌的吞噬。巨噬細(xì)胞A類清道夫受體(Scavenger Receptor，SR)如SRA和MARCO，作為一類重要的先天性免疫受體，介導(dǎo)對多種病原菌的識(shí)別和吞噬，包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等。我們前期的研究顯示豬SRA和MARCO可以介導(dǎo)對臨床常見分離菌如金黃色葡萄球菌、副豬嗜血桿菌等的吞噬。進(jìn)一步，我們的前期結(jié)果

3、顯示PRRSV感染下調(diào)SRA和MARCO在PAM上的表達(dá)(mRNA水平)。因此，這些結(jié)果促使我們假想:PRRSV感染可通過下調(diào)清道夫受體SRA和MARCO的表達(dá)抑制細(xì)菌的吞噬，從而促進(jìn)細(xì)菌的繼發(fā)感染。本研究聚焦于PRRSV感染下調(diào)清道夫受體表達(dá)機(jī)制研究，具體如下:
　　首先，利用Western blot方法對豬不同組織中SRA和MARCO的表達(dá)情況進(jìn)行了分析。在肺中，我們可以檢測到SRA和MARCO的表達(dá)。但在PAM上SRA有較高

4、水平的表達(dá)，MARCO的表達(dá)量較低，幾乎檢測不到其表達(dá)。
　　隨后，我們對PRRSV感染下調(diào)清道夫受體表達(dá)機(jī)制進(jìn)行了研究。鑒于MARCO在PAMs細(xì)胞上低水平表達(dá)，因此，我們主要聚焦于PRRSV感染下調(diào)SRA表達(dá)的機(jī)制研究。具體的研究結(jié)果為:
　　1)我們收取PRRSV感染的PAM不同時(shí)間點(diǎn)的mRNA和蛋白樣品進(jìn)行分析，結(jié)果顯示PRRSV感染可通過抑制轉(zhuǎn)錄下調(diào)SRA的表達(dá)。
　　2)利用UV滅活的病毒作為對照，我們的研

5、究顯示PRRSV感染下調(diào)SRA的表達(dá)與病毒復(fù)制相關(guān)。
　　3)我們克隆了豬的SRA的啟動(dòng)子并構(gòu)建表達(dá)蟲熒光素酶的報(bào)告質(zhì)粒，通過測定luciferase驗(yàn)證SRA啟動(dòng)子的有活性;進(jìn)一步，通過缺失突變，鑒定出核心啟動(dòng)子區(qū)域。利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測技術(shù)，篩選到PRRSV的非結(jié)構(gòu)蛋白NSP4可以抑制SRA的熒光素酶活性。進(jìn)一步，我們的研究發(fā)現(xiàn)NSP4主要抑制其核心啟動(dòng)子的活性。
　　4)通過染色質(zhì)免疫共沉淀方法(CHIP)驗(yàn)證N