豬β-防御素抗菌、抗氧化功能及其對腸上皮細(xì)胞黏膜屏障功能的影響.pdf

1、本研究采用化學(xué)方法合成pBD-1和pBD-2，在研究pBD-1和pBD-2體外抑菌活性、體外抗氧化活性和細(xì)胞毒性等生物學(xué)功能的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究了pBD-1和pBD-2對IPEC-J2細(xì)胞緊密連接蛋白和黏蛋白基因表達(dá)的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　 采用改良的微量肉湯稀釋法研究了pBD-1和pBD-2對8種革蘭氏陰性菌和3種革蘭氏陽性菌的抗菌活性，并利用透射電鏡初步探究了pBD-1和pBD-2可能的殺菌機(jī)制

2、;試驗(yàn)還研究了pBD-1和pBD-2的體外抗氧化活性。體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，pBD-1對Escherichia coli EPEC078(:)K80和Bacillus subtilis ATCC6633具有較好的抑菌活性，最小抑菌濃度均為32μg/mL，pBD-2僅對Pseudomonas.aeruginosa CMCC10104有較好的抗菌活性，最小抑菌濃度為8μg/mL，對其它細(xì)菌抗菌活性較弱;透射電鏡觀察結(jié)果表明，pBD-1和pB

3、D-2能夠通過破壞菌體細(xì)胞膜殺滅細(xì)菌;抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pBD-1和pBD-2在0-256μg/mL范圍內(nèi)，具有清除自由基的功能和還原力，且呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。pBD-1和pBD-2對紅細(xì)胞的溶血率、對IPEC-J2的LDH釋放率和細(xì)胞增殖率影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pBD-1和pBD-2的細(xì)胞毒性較小。上述研究結(jié)果揭示pBD-1和pBD-2可通過作用于細(xì)菌細(xì)胞膜對特定細(xì)菌發(fā)揮抗菌作用，同時(shí)還具有一定的抗氧化活性，且細(xì)胞毒性較低。

4、　　 為研究pBD-1和pBD-2對腸道緊密連接蛋白和黏蛋白基因表達(dá)的影響，試驗(yàn)將25μg/mL、100μg/mL的pBD-1和pBD-2添加到IPEC-J2細(xì)胞中，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測pBD-1和pBD-2處理6h和24 h后，對IPEC-J2細(xì)胞中緊密連接蛋白和黏蛋白基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果表明:處理6h后，25μg/mLpBD-1能夠顯著提高所檢測緊密連接蛋白和黏蛋白基因的表達(dá)量，100μg/mLpBD-1能顯著提高cla

5、udin4、Zo-1和MUC1的基因表達(dá)量，顯著降低MUC20的基因表達(dá)量，對occludin和claudin3的基因表達(dá)沒有影響;處理24 h后，25μg/mL pBD-1能顯著降低occludin、Zo-1和MUC20基因的表達(dá)量，對claudin3、claudin4和MUC20沒有顯著影響，100μg/mLpBD-1顯著提高M(jìn)UC1的基因表達(dá)量，顯著降低occludin和MUC20基因的表達(dá)量，對claudin3、claudin4

6、的基因表達(dá)沒有顯著影響。除100μg/mL pBD-2對MUC20的基因表達(dá)量無顯著影響外，處理6h和24 h后，25μg/mL、100μg/mL的pBD-2能夠顯著提高所檢測緊密連接蛋白和黏蛋白基因的表達(dá)量。綜上，25μg/mL pBD-1和pBD-2處理IPEC-J2細(xì)胞6h后，緊密連接蛋白（occludin、Zo-1、claudin3和claudin4）和黏蛋白（MUC1和MUC20）基因的表達(dá)量提高較多，隨著pBD-1和pBD-