脂肪組織提取物對組織工程室內(nèi)構(gòu)建物早期血管形成及成脂化影響的研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)擬將脂肪組織提取物注入到兔組織工程室內(nèi)，通過對組織工程室內(nèi)滲出液進(jìn)行生化檢測分析，揭示工程室內(nèi)環(huán)境的變化，而后觀察工程室內(nèi)構(gòu)建組織的組織學(xué)形態(tài)變化及血管化情況，探討通過加強(qiáng)早期的血管化，能否構(gòu)建較純化的工程化脂肪組織。
　　方法：
　　1、脂肪組織提取物對血管和脂肪生成的誘導(dǎo)
　　利用兔腹股溝的脂肪組織，將其分離培養(yǎng)24小時(shí)，過濾，離心后提取上清液，ELISA檢測相關(guān)因子，并將脂肪來源于細(xì)胞、血

2、管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞加入到中提取的脂肪組織提取物(ATE)中，觀察其對成脂化和成血管的作用
　　2、脂肪組織提取物注入工程室內(nèi)觀察組織工程室內(nèi)構(gòu)建組織的變化
　　構(gòu)建兔脂肪組織工程室模型，實(shí)驗(yàn)組:在模型構(gòu)建后將脂肪組織提取物1周后注入一側(cè)工程室內(nèi)，對照組:另一側(cè)注入等量的生理鹽水。分別于不同時(shí)間點(diǎn)觀察脂肪組織工程室構(gòu)建物的大體及組織學(xué)變化過程，并檢測脂肪組織工程室滲出液中細(xì)胞因子及生長因子的變化。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3、
　　數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。兩組之問比較采用配對t檢驗(yàn);不同時(shí)間點(diǎn)的差異采用協(xié)方差分析。P值小于0.05說明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、脂肪組織提取物(ATE)加入到到聯(lián)合培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基中，血管形成實(shí)驗(yàn)顯示ATE組血管內(nèi)皮細(xì)胞形成連續(xù)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。ATE加入脂肪來源干細(xì)胞中(ASCs)的培養(yǎng)基中，油紅O染色顯示，ATE組ASCs在

4、無成脂誘導(dǎo)的情況下，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的脂滴聚集。
　　2、脂肪瓣的體積在注入ATE后3天、1周、2周、3周、4周、7周時(shí)，早期構(gòu)建組織成膠凍狀，后期軟組織表面可見明顯包膜形成，觸之較韌。注入ATE后，實(shí)驗(yàn)組新生組織體積較對照組明顯增大
　　3、在脂肪組織發(fā)展過程中開始階段，對照組組和實(shí)驗(yàn)組均有大量新生小血管出現(xiàn)在間質(zhì)區(qū)域，實(shí)驗(yàn)組組比對照組新產(chǎn)生的小血管密度大。隨著時(shí)間推移，對照組和實(shí)驗(yàn)組注入組新生組織邊緣纖維沉積中有大量新生血

5、管島狀樣脂肪細(xì)胞新生，實(shí)驗(yàn)組中邊緣纖維沉積中有大量的新生的幼稚脂肪細(xì)胞，而對照組中只有零散的分布，脂肪新生提前，并且血管化逐漸成熟。后期兩組新生組織已形成正常的脂肪組織小葉樣結(jié)構(gòu)。觀察構(gòu)建物的外層形成的薄膜發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組新生脂肪組織邊緣包膜較對照組更薄，結(jié)構(gòu)排列更為規(guī)則
　　4、CD31免疫組化發(fā)現(xiàn)，早期血管新生和數(shù)量明顯增多，注入ATE后1周總的毛細(xì)血管的數(shù)量是最高的，并且實(shí)驗(yàn)組較對照組多。
　　結(jié)論：
　　1、利用兔