農(nóng)藥多殘留免疫芯片-納米金增敏型檢測體系構(gòu)建.pdf

1、隨著農(nóng)藥種類及數(shù)量的不斷增多，實現(xiàn)多殘留檢測已成為農(nóng)藥免疫分析方法的必然趨勢。本文以硝酸纖維素膜為載體，抗原為捕獲探針，膠體金做標記材料，制作了一個含有7個抗原抗體組合的可視化免疫芯片，可同時檢測三唑磷、對硫磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、甲氰菊酯、克百威、噻蟲啉、百菌清和多菌靈9種農(nóng)藥。通過對免疫芯片反應的各項條件進行優(yōu)化，確定了間接競爭檢測模式、芯片載體類型、反應抗原抗體的濃度、金標二抗的稀釋倍數(shù)、封閉液、金增強液、反應緩沖液種類、pH、

2、 NaCl濃度、反應緩沖液中有機助溶劑含量及各個步驟的反應時間。
　　在最適優(yōu)化條件下，三唑磷檢測靈敏度(IC50)、最低檢出限(LOD，IC10)及肉眼檢出限（vLOD）分別為0.41 ng/mL、0.02 ng/mL、1 ng/mL;甲基對硫磷為10.77 ng/mL、0.38 ng/mL、100 ng/mL;甲氰菊酯為2.24 ng/mL、0.13ng/mL、10 ng/mL;克百威為27.22 ng/mL、3.76 ng/

3、mL、100 ng/mL;噻蟲啉為46.52 ng/mL、4.51 ng/mL、100 ng/mL;百菌清為1.17 ng/mL、0.20 ng/mL、5 ng/mL;多菌靈為0.61 ng/mL、0.07 ng/mL、5 ng/mL;對硫磷為279.5 ng/mL、2.4ng/mL、1000 ng/mL;殺螟硫磷為77.9 ng/mL、0.6 ng/mL、500ng/mL。此靈敏度可與經(jīng)典的ELISA法相媲美，各藥的最低檢出限均可滿足

4、我國對食品中農(nóng)藥最大殘留限量MRL值的規(guī)定(GB2763-2014)。
　　實驗結(jié)果表明，該免疫芯片分析方法具有較好的準確性和精密度。將其應用于蔬菜、水果和谷物類樣品檢測，在首先確定了基質(zhì)效應及稀釋倍數(shù)后，樣品添加回收率實驗結(jié)果表明，絕大多數(shù)農(nóng)藥的添加回收率為70.1％-119.1％，變異系數(shù)為4.12％-19.93％，滿足農(nóng)藥殘留分析的基本要求。儀器比對實驗表明，該方法與質(zhì)譜儀具有較高的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)(R2)高達0.94。