野百合堿致肺動(dòng)脈高壓中細(xì)胞自噬分子的表達(dá)和功能.pdf

1、目的：
　　觀察細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化，探討細(xì)胞自噬在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病中的可能作用。
　　方法：
　　建立野百合堿肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型：SD大鼠以2％MCT按60mg/kg劑量一次性腹腔注射，正常飼養(yǎng)3wk。并測(cè)定下列指標(biāo)：
　?、儆倚氖沂湛s壓（RVSP）；
　?、贖E染色觀察肺動(dòng)脈血管形態(tài)；
　?、塾脤?shí)時(shí)定量 PCR的方法檢測(cè)細(xì)胞自噬標(biāo)志性基因LC3和p62的mRNA在模型組的

2、動(dòng)態(tài)表達(dá)；
　　④分別用免疫組織化學(xué)和Western blot方法測(cè)定細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3和p62在肺動(dòng)脈高壓模型組織中的動(dòng)態(tài)變化.。
　　結(jié)果：
　　與正常對(duì)照組（CON組）相比
　?、倌Ｐ徒M(MCT組)的RVSP隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高（P<0.05），證明PAH模型建造成功；
　　②HE染色見(jiàn)肺動(dòng)脈平滑肌出現(xiàn)不同程度的增生，管壁厚度增加，管腔逐漸狹窄并伴有不同程度的損傷甚至斷裂；肺血管損傷明顯，內(nèi)皮

3、細(xì)胞變性腫脹，突向血管腔內(nèi)，甚至壞死脫落；
　?、跰CT組LC3的mRNA表達(dá)相比對(duì)照組呈遞增趨勢(shì)，而p62的mRNA表達(dá)則隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降；
　　④不同時(shí)間點(diǎn)模型組LC3的平均灰度值均明顯升高，p62的平均灰度值均下降；模型組的LC3蛋白過(guò)表達(dá)，而p62蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　野百合堿可以成功誘導(dǎo)出SD大鼠肺動(dòng)脈高壓模型；自噬相關(guān)因子LC3，p62在PAH發(fā)病中的動(dòng)態(tài)表達(dá)提示自噬可能參與了PAH的發(fā)病