辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓的作用及機制研究.pdf

1、本文分為兩部分內(nèi)容： 第一部分 研究目的： 1.觀察辛伐他汀對野百合堿(monocrotaline，MCT)誘導(dǎo)的己形成明顯肺動脈高壓大鼠的肺循環(huán)血流動力學(xué)和肺小動脈重構(gòu)的作用。 2.觀察辛伐他汀(simvastatin，Sim)對MCT大鼠肺組織血紅素加氧酶-1(hemeoxygellase 1，H0-1)和內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶(endothelial nitirc oxidesynthase，eNO

2、S)蛋白表達(dá)的影響，探討辛伐他汀對PH的作用機制。 方法： 1.大鼠48只，隨機分為五組。C組(正常對照組8只)：生理鹽水腹部皮下注射1次；s組(辛伐他汀組8只)：生理鹽水腹部皮下注射1次，并于注射后后第21天至第35天給予辛伐他汀(2mg/kg/d)灌胃；P組(MCT誘導(dǎo)肺動脈高壓組12只)：MCT(80mg/kg)腹部皮下注射1次；PS組(辛伐他汀干預(yù)肺動脈高壓組8只)：MCT(80mg/kg)腹部皮下注射1次，并于

3、注射后第21天至第35天給予辛伐他汀(2mg/kg/d)灌胃；PSZ組(血紅素加氧酶抑制劑組12只)：MCT(80mg/kg)給予大鼠腹部皮下注射1次，于注射后第21天至第35天給予辛伐他汀(2mg/kg/d)灌胃，并分別在第21天、第28天給予血紅素加氧酶的抑制劑鋅原卟啉(20umol/kg)腹部皮下注射。 2.行右心導(dǎo)管檢查，測定肺動脈平均壓(mPAP)、右心室收縮壓(RVSP)。分離心臟，沿室間隔分離右心室，分別稱量右心

4、室、左心室+室間隔，計算右心室肥厚指數(shù)。 3.肺組織切片HE染色，應(yīng)用病理圖像分析系統(tǒng)測定并計算各組肺小動脈壁面積/管面積比(W/V)和管壁厚/管外徑比(T/D)。 4.采用免疫組化方法觀察H0-1在各組大鼠肺組織中表達(dá)部位，通過westernblot方法半定量測定肺組織H0-1、eNOS蛋白表達(dá)水平。 5.應(yīng)用t檢驗及單因素方差分析比較組間差異，P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1.辛伐他汀

5、對野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠一般情況的影響：MCT皮下注射后第2周P組大鼠開始出現(xiàn)皮毛不光順，活動遲緩表現(xiàn)，隨時間延長部分大鼠出現(xiàn)口鼻部紫紺，腹水，第3-5周先后5只大鼠死亡，死前數(shù)天大鼠有明顯呼吸急促、口鼻紫紺，進(jìn)食差表現(xiàn)，P組大鼠死亡率為42％，尸檢1只，雙側(cè)胸腔積液，肺組織表面有點片狀出血，右心室明顯增大擴(kuò)張，腹腔積液，肝臟明顯腫大。至第5周時P組大鼠體重較C組明顯降低。Sim干預(yù)肺動脈高壓的PS組大鼠體重較P組增加，差異有顯著性

6、(p<0.05)，無明顯口鼻紫紺，皮毛有光澤；PSZ組(McT+sim+H0-1抑制劑ZnPP組)大鼠體重明顯降低，與PS組比較差異有顯著性(p(0.05)，與P組比較差異無顯著性(p>0.05)，至第5周實驗結(jié)束時共死亡大鼠3只，死亡率25％；S組與C組比較，體重?zé)o顯著差異(p>0.05)。 2.辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠肺動脈平均壓、右心室收縮壓及右心室肥厚指數(shù)的作用：P組大鼠mPAP、RVSP、RVHI均較c組明

7、顯增高(65.87+15.51mmHg vs 19.25±3.20mmHg，91.00±12.83mmHg Vs 42.50±4.37mmHg，0.53±0.06 vs 0.24土0.03，p<0.001)；辛伐他汀降低MCT大鼠(PS組)mPAP、RVSP、RVHI，與P組比較差異有顯著(35.63±5.10mmHg vs 65.78±15.51mmHg，57.13±4.79mmHg VS 42.50±4.37mmHg，0.33±0.

8、05 vs 0.53±0.06，p<0.05)；H0-1抑制劑ZnPP(PSZ組)部分抑制辛伐他汀對MCT大鼠mPAP、RVSP和RVHI的作用，與Ps組比較差異有顯著性(52.88±17.45mmHg vs 35.63 ±5.10mmHg.71.63 ±14.71mmHg vs 57.13 ±4.79mmHg，0.51±0.05 vs 0.33±0.05，p<0.05)；S組與C組的mPAP、RVSP及RVHI比較差異無顯著性(p>0

9、.05)。 3.辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠肺小動脈組織形態(tài)學(xué)的影響：P組肺動脈壁面積/管面積比(W/V)以及管壁厚/管外徑比(T/D)明顯增加，與C組比較差異有顯著性(65.92±7.1 9％vs 41.26±6.25％，52.00±5.53％vs 29.13±2.47％，p<0.001)；辛伐他汀(PS組)減輕MCT大鼠W/V、T/D，與P組比較差異有顯著性(50.78±9.03％vs 65.92±7.19％，43.

10、75±4.23％vs 52.00±5.35％，p<0.01)；ZnPP部分抑制辛伐他汀(PSZ組)對W/V、T/D的作用，與PS組比較差異有顯著性(59.51±8.01％vs 50.78±9.03％，49.75±3.50％vs 43.75±4.23％，p<0.05)；C、S組間比較W/V、T/D差異無顯著性(p>0.05)。 結(jié)論： 1.辛伐他汀可減輕野百合堿誘導(dǎo)大鼠已形成的明顯增高的肺動脈平均壓和右心室肥厚，改善已形成

11、的肺血管重構(gòu)改變。 2.辛伐他汀可增加野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞中HO-1蛋白表達(dá)，及恢復(fù)eNOS在肺組織中表達(dá)。 3.HO-1抑制劑鋅原卟啉部分抑制辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠的作用，提示辛伐他汀除可通過HO-1途徑發(fā)揮作用[關(guān)鍵詞]肺動脈高壓；辛伐他?。环蝿用}平均壓；右室收縮壓；血紅素加氧酶-1；一氧化氮合成酶； 第二部分：研究目的： 1.觀察早期應(yīng)用辛伐他汀對野百合

12、堿(monocrotaline,MCT)誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠的保護(hù)作用。 2.觀察野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠肺組織白細(xì)胞介素6(interleukin 6，IL-6)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)及單核細(xì)胞趨化蛋白(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)的變化，探討早期應(yīng)用辛伐他汀對McT大鼠肺動脈高壓的作用機制。 方法： 1.實驗

13、動物分組：Sprague-Dawley大鼠32只，每組8只，隨機分為對照組(C組)：腹部皮下注射生理鹽水1次；辛伐他汀組(S)：腹部皮下注射生理鹽水1次，并于注射當(dāng)日開始辛伐他汀(2mg/kg/d)灌胃3周；肺動脈高壓組(P組)：腹部皮下注射野百合堿(80mg/kg)1次；野百合堿干預(yù)肺動脈高壓組(PS組)：野百合堿(80mg/kg)腹部皮下注射1次，并于注射當(dāng)日開始辛伐他汀(2mg/kg/d)灌胃3周。 2.于第3周行右心導(dǎo)管

14、檢查測定肺動脈平均壓、右心室收縮壓；分離心臟，沿室間隔分離右心室，分別稱量右心室、左心室+室間隔，計算右心室肥厚指數(shù)。 3.肺組織切片HE染色對肺小動脈周圍炎性細(xì)胞浸潤情況進(jìn)行評分；應(yīng)用病理圖像分析系統(tǒng)測定并計算各組肺小動脈壁面積/管面積比和管壁厚/管外徑比。 4.ELISA方法測定肺組織勻槳IL-6、TNF-α和MCP-1水平。 5.應(yīng)用t檢驗及單因素方差分析比較組間差異，P<0.05為差異有顯著性。

15、結(jié)果： 1.辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)大鼠一般情況的影響： P組大鼠MCT皮下注射后體重較正常對照組(C組)明顯減低，差異有顯著性(273±8.80g vs 325±7.64g，p<0.05)，從第2周開始部分大鼠出現(xiàn)活動遲緩、皮毛無光澤和呼吸急促表現(xiàn)；辛伐他汀干預(yù)肺動脈高壓組(Ps組)大鼠體重較P組明顯改善，差異有顯著性(306±10.63g vs 273±8.80g，p<0.05)，與C組比較差異無顯著性(p>0.05)，至實驗

16、完成時大鼠活動力，皮毛光澤與C組無差異；S、C組間大鼠體重?zé)o顯著差異(326±11.36g vs 325±7.64g，p>0.05)。 2.辛伐他汀對野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈平均壓、右心室收縮壓及右心室肥厚指數(shù)的影響： 正常對照C組肺動脈平均壓(mPAP)、右心室收縮壓(RVSP)和右心室肥厚指數(shù)(RVHI)分別為20.05±3.96mmHg，44.67±8.62mmHg和0.27±0.04；MCT誘導(dǎo)肺動脈高壓組大鼠(P

17、組)mPAP、RVSP和RVHI(34.37±9.16mmHg，87.63±16.36mmHg，0.39±0.06)均較C組明顯增高，差異有顯著性(p<0.01)；辛伐他汀干預(yù)可抑制MCT誘導(dǎo)大鼠(PS組)的mPAP、RVSP、RVHI(23.25±7.32mmHg，55.12±11.90mmHg，0.32±0.04)的升高，與P組比較差異有顯著性(p<0.05)，其中mPAP、RVSP與正常對照C組比較，差異無顯著性(p>0.05)；