基于磺基水楊酸的水產(chǎn)品氟喹諾酮類藥物酶聯(lián)免疫檢測前處理技術(shù)研究.pdf

1、免疫分析法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的新型分析技術(shù)。然而，免疫檢測的大多前處理過程與常規(guī)大型儀器相同，有機(jī)溶劑提取，SPE、LLE或LPE凈化，不能更好的體現(xiàn)免疫檢測的快捷性;而僅僅采取簡單的提取，可能會造成假陽性或假陰性的結(jié)果，大大降低免疫檢測的靈敏度及可靠性，這主要是由于基質(zhì)對免疫分析的干擾。因此，本論文旨在建立既能消除基質(zhì)影響又簡便快速的樣品前處理方法，從而最大限度地實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的目的。
　　本論文首先

2、以三種鲆鰈魚（大菱鲆、牙鲆、舌鰨）為主要研究對象，研究探討了加熱，有機(jī)溶劑等對水產(chǎn)品藥物檢測中的主要基質(zhì)蛋白質(zhì)的去除效果及基質(zhì)效應(yīng)性，發(fā)現(xiàn)僅僅靠加熱并不能有效的去除蛋白基質(zhì)的影響，有機(jī)溶劑能有效的去除蛋白基質(zhì)的影響，但對免疫檢測有著較大影響，需通過加熱、旋蒸等方法去除，這同時也增加了樣品前處理的復(fù)雜性。
　　通過免疫印跡及SDS-PAGE等方法探究了不同種類和濃度的酸對魚肉蛋白基質(zhì)的去除效果，結(jié)合其對免疫分析的影響，發(fā)現(xiàn)低濃度的磺

3、基水楊酸既可消除蛋白基質(zhì)的影響又對檢測影響較小。在此基礎(chǔ)上，對提取劑濃度、pH值等條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了簡便快速的氟喹諾酮類藥物樣品前處理方法并進(jìn)行了方法檢測限、精密度和準(zhǔn)確度的測定，此外，還與常規(guī)樣品前處理方法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，檢測限為0.1μg/L，工作曲線是0.1-25.6μg/L，對三種鲆鰈魚中氟喹諾酮類藥物殘留進(jìn)行檢測，魚肉樣品經(jīng)過2％磺基水楊酸提取后即可消除基質(zhì)效應(yīng)，回收率為68％～94％，變異系數(shù)小于20％，與常規(guī)前處理

4、方法相比，所建方法不需要凈化過程，前處理時間與傳統(tǒng)前處理方法的45～60min相比，僅需20～30min，且不需要有機(jī)溶劑和特殊儀器。
　　在新建樣品前處理方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步將此前處理方法應(yīng)用于不同來源的魚蝦上，發(fā)現(xiàn)雖然不同來源的魚蝦蛋白質(zhì)組分不同，但2％磺基水楊酸均能消除蛋白質(zhì)基質(zhì)影響，魚蝦樣品基質(zhì)曲線與標(biāo)準(zhǔn)曲線的吻合度較好，回收率在65～95％之間，變異系數(shù)小于20％，說明此樣品前處理方法對水產(chǎn)品均能應(yīng)用。通過高效液相色譜檢

5、測方法，對建立的氟喹諾酮類藥物檢測方法進(jìn)行數(shù)據(jù)確證，兩種方法的檢測結(jié)果一致性很高，線性相關(guān)系數(shù)R2值在0.97以上，表明本方法可應(yīng)用于水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物快速定性及定量分析。
　　本研究簡化和優(yōu)化了酶聯(lián)免疫檢測水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物的新型樣品前處理方法，首次使用磺基水楊酸作為樣品前處理方法的提取劑，樣品經(jīng)過提取后即可消除基質(zhì)效應(yīng)，不需要凈化步驟即可檢測，是有效簡便的基質(zhì)效應(yīng)消除方法和快速簡便的樣品前處理方法，更好體現(xiàn)免疫檢測的優(yōu)