基于磺基水楊酸的水產(chǎn)品氟喹諾酮類藥物酶聯(lián)免疫檢測前處理技術研究.pdf

1、免疫分析法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的新型分析技術。然而，免疫檢測的大多前處理過程與常規(guī)大型儀器相同，有機溶劑提取，SPE、LLE或LPE凈化，不能更好的體現(xiàn)免疫檢測的快捷性;而僅僅采取簡單的提取，可能會造成假陽性或假陰性的結果，大大降低免疫檢測的靈敏度及可靠性，這主要是由于基質對免疫分析的干擾。因此，本論文旨在建立既能消除基質影響又簡便快速的樣品前處理方法，從而最大限度地實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測的目的。
　　本論文首先

2、以三種鲆鰈魚（大菱鲆、牙鲆、舌鰨）為主要研究對象，研究探討了加熱，有機溶劑等對水產(chǎn)品藥物檢測中的主要基質蛋白質的去除效果及基質效應性，發(fā)現(xiàn)僅僅靠加熱并不能有效的去除蛋白基質的影響，有機溶劑能有效的去除蛋白基質的影響，但對免疫檢測有著較大影響，需通過加熱、旋蒸等方法去除，這同時也增加了樣品前處理的復雜性。
　　通過免疫印跡及SDS-PAGE等方法探究了不同種類和濃度的酸對魚肉蛋白基質的去除效果，結合其對免疫分析的影響，發(fā)現(xiàn)低濃度的磺

3、基水楊酸既可消除蛋白基質的影響又對檢測影響較小。在此基礎上，對提取劑濃度、pH值等條件進行優(yōu)化，建立了簡便快速的氟喹諾酮類藥物樣品前處理方法并進行了方法檢測限、精密度和準確度的測定，此外，還與常規(guī)樣品前處理方法進行了比較，結果表明，檢測限為0.1μg/L，工作曲線是0.1-25.6μg/L，對三種鲆鰈魚中氟喹諾酮類藥物殘留進行檢測，魚肉樣品經(jīng)過2％磺基水楊酸提取后即可消除基質效應，回收率為68％～94％，變異系數(shù)小于20％，與常規(guī)前處理

4、方法相比，所建方法不需要凈化過程，前處理時間與傳統(tǒng)前處理方法的45～60min相比，僅需20～30min，且不需要有機溶劑和特殊儀器。
　　在新建樣品前處理方法的基礎上，進一步將此前處理方法應用于不同來源的魚蝦上，發(fā)現(xiàn)雖然不同來源的魚蝦蛋白質組分不同，但2％磺基水楊酸均能消除蛋白質基質影響，魚蝦樣品基質曲線與標準曲線的吻合度較好，回收率在65～95％之間，變異系數(shù)小于20％，說明此樣品前處理方法對水產(chǎn)品均能應用。通過高效液相色譜檢

5、測方法，對建立的氟喹諾酮類藥物檢測方法進行數(shù)據(jù)確證，兩種方法的檢測結果一致性很高，線性相關系數(shù)R2值在0.97以上，表明本方法可應用于水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物快速定性及定量分析。
　　本研究簡化和優(yōu)化了酶聯(lián)免疫檢測水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物的新型樣品前處理方法，首次使用磺基水楊酸作為樣品前處理方法的提取劑，樣品經(jīng)過提取后即可消除基質效應，不需要凈化步驟即可檢測，是有效簡便的基質效應消除方法和快速簡便的樣品前處理方法，更好體現(xiàn)免疫檢測的優(yōu)