遠志皂苷對Aβ誘導(dǎo)的PC12細胞功能與細胞周期的調(diào)控及其轉(zhuǎn)運清除的作用.pdf

1、遠志皂苷（Tenuigenin。Ten）是中藥遠志的主要成分之一，提取于干燥的遠志科植物的細葉遠志（Polygala tenuifolia Willd）和寬葉遠志（Polygala sibirica L.）的根中。在傳統(tǒng)中醫(yī)臨床治療中，遠志一直被用于治療心腎不交引起的失眠多夢、健忘驚悸、神志恍惚等癥，具有安神益智等作用?，F(xiàn)代研究表明其在神經(jīng)疾病方面具有多種作用，其中包括抑制Aβ毒性、調(diào)控Tau蛋白、抗炎癥抗氧化、減少谷氨酸神經(jīng)毒性以及細

2、胞凋亡的抑制等。但是對于遠志皂苷更為深入的分子機制研究則比較少，如有關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)的神經(jīng)細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等，而關(guān)于遠志皂苷對Aβ誘導(dǎo)細胞周期紊亂的調(diào)控作用的更是未見報道。本論文將繼續(xù)就遠志皂苷的對神經(jīng)細胞功能與細胞周期的的調(diào)控作用及其分子機制作進一步研究。具體內(nèi)容如下：
　　1. Ten對Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細胞活力損傷和凋亡的研究：使用Aβ25-35處理PC12細胞建立細胞損傷模型，MTT法檢測遠志皂苷對 Aβ25-

3、35誘導(dǎo) PC12細胞存活率的影響；RT-qPCR檢測凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8的基因水平表達變化；分光光度法檢測 Caspase-3及 Caspase-8的酶活性變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，遠志皂苷能提高Aβ誘導(dǎo)的PC12細胞存活率，對Aβ誘導(dǎo)的Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8的異常表達有調(diào)控作用。結(jié)果顯示，遠志皂苷對 Aβ誘導(dǎo)的PC12細胞損傷和凋亡有保護作用。
　　2.

4、Ten對Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細胞氧化應(yīng)激水平的研究：DCFH-DA熒光探針測定活性氧（ROS）含量；硫代巴比妥酸（TBA）法檢測丙二醛（MDA）濃度；黃嘌呤氧化法測定超氧化物歧化酶（SOD）活性；NADPH法測定谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Aβ誘導(dǎo)的PC12細胞中，遠志皂苷能降低ROS和MDA的濃度，以及提高SOD、GSH-Px活性。結(jié)果顯示，遠志皂苷能提高Aβ誘導(dǎo)損傷的PC12細胞的抗氧化水平和氧化應(yīng)激

5、能力。
　　3. Ten對Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細胞轉(zhuǎn)運和清除Aβ能力的影響：Western blot檢測轉(zhuǎn)運蛋白RAGE（晚期糖基化終產(chǎn)物受體）和LRP1（低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-1）表達水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Aβ誘導(dǎo)損傷的PC12細胞中，Ten能夠逆轉(zhuǎn)RAGE與LRP1蛋白的異常表達。結(jié)果顯示，Ten能加快PC12細胞中Aβ的轉(zhuǎn)運和清除。
　　4. Ten對Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細胞周期紊亂的調(diào)控作用：W

6、estern blot檢測遠志皂苷對細胞周期蛋白p21、Cyclin D1及E2F1表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Aβ誘導(dǎo)的PC12細胞中，遠志皂苷能夠上調(diào)p21的表達，下調(diào)Cyclin D1及E2F1的表達。結(jié)果顯示。Ten能抑制PC12神經(jīng)細胞周期的再活化過程。
　　上述研究表明，遠志皂苷對Aβ25-35誘導(dǎo)PC12細胞功能與細胞周期紊亂具有保護作用，當(dāng)中分子機制可能是：遠志皂苷通過調(diào)控RAGE、LRP1蛋白表達，提高Aβ的轉(zhuǎn)運及清