p52SHC3及其結(jié)構(gòu)域?qū)C12細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的：SHC3蛋白屬于Shc家族，Shc家族包括SHC1、SHC2、SHC3和SHC4四種蛋白。SHC1(又稱ShcA或Shc)發(fā)現(xiàn)最早，在哺乳動物的組織中廣泛表達(dá)，但不存在于成熟的神經(jīng)元中；SHC2(又稱ShcB)在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，但在其他組織中不表達(dá)；SHC3(又稱N-Shc、ShcC和Rai)只在成熟的神經(jīng)元中表達(dá)，在其它組織中不表達(dá)；SHC4(又稱ShcD)是新近發(fā)現(xiàn)的成員，在骨骼肌中表達(dá)，其它組織中的表達(dá)情況還不清楚。Sh

2、c家族都含有兩種功能性結(jié)構(gòu)域：能和磷酸化酪氨酸結(jié)合的PTB結(jié)構(gòu)域和SH2結(jié)構(gòu)域以及一個含有磷酸化酪氨酸的中央?yún)^(qū)域結(jié)構(gòu)域CH1。PTB結(jié)構(gòu)域和SH2結(jié)構(gòu)域都可以和活化的酪氨酸激酶受體結(jié)合，CH1結(jié)構(gòu)域則被認(rèn)為可以和Grb2結(jié)合，參與下游的信號通路，也有人認(rèn)為CH1結(jié)構(gòu)域可以將Shc蛋白定位于細(xì)胞膜上，不經(jīng)Grb2即可傳遞上游信號。SHC3蛋白有兩種異構(gòu)體，p66SHC3和p52SHC3，兩者只是在N-末端不同。和p52SHC3相比，p66

3、SHC3多了一個類似于中央?yún)^(qū)結(jié)構(gòu)域的CH2結(jié)構(gòu)域。有研究認(rèn)為SHC3可以促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的分化，維持神經(jīng)前體細(xì)胞和神經(jīng)元的存活，但是SHC3對可分裂細(xì)胞周期的影響還沒有人研究過。本項研究旨在通過對p52SHC3及其結(jié)構(gòu)域?qū)C12細(xì)胞周期的影響，探討p52SHC3及其結(jié)構(gòu)域?qū)ζ渌煞至鸭?xì)胞周期的影響，進(jìn)一步了解p52SHC3及其不同結(jié)構(gòu)域的功能。 方法：應(yīng)用Western Blot技術(shù)驗證SHC3在大鼠大腦、肺、肝和心臟等不同組

4、織中的分布，將p52SHC3全長及其PTB結(jié)構(gòu)域、SH2結(jié)構(gòu)域、PTB+CH1結(jié)構(gòu)域和CH1+SH2結(jié)構(gòu)域插入載體pEGFP-N1中，構(gòu)建其真核表達(dá)載體，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法，將構(gòu)建好的含有p52SHC3全長及其PTB結(jié)構(gòu)域、SH2結(jié)構(gòu)域、PTB+CH1結(jié)構(gòu)域和CH1+SH2結(jié)構(gòu)域的表達(dá)載體以及空載體轉(zhuǎn)染進(jìn)PC12細(xì)胞中，在轉(zhuǎn)染后36h和60h，使用流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP陽性的細(xì)胞中G0/G1期的細(xì)胞所占的百分比。 結(jié)果：p52S

5、HC3在大鼠的大腦中表達(dá)量比較高，在大鼠的肺、肝和心臟中則沒有表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測的結(jié)果顯示，和轉(zhuǎn)染空載的PC12細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染p52SHC3全長的PC12細(xì)胞中，G0/G1期的細(xì)胞比例上升，轉(zhuǎn)染PTB結(jié)構(gòu)域和PTB+CH1結(jié)構(gòu)域的PC12細(xì)胞中，G0/G1期的細(xì)胞所占的比例明顯上升，而CH1+SH2結(jié)構(gòu)域的PC12細(xì)胞中，G0/G1期的細(xì)胞所占的比例下降，轉(zhuǎn)染SH2結(jié)構(gòu)域的PC12細(xì)胞G0/G1期的細(xì)胞所占的比例無明顯變化。

6、結(jié)論：(1)p52SHC3全長可以抑制PC12細(xì)胞的增殖，PTB結(jié)構(gòu)域和PTB+CH1結(jié)構(gòu)域也可以將PC12細(xì)胞抑制在G0/G1期，CH1+SH2結(jié)構(gòu)域則可以促進(jìn)PC12細(xì)胞的增殖，SH2結(jié)構(gòu)域?qū)C12細(xì)胞周期無明顯作用；(2)p52SHC3有可能是通過其PTB結(jié)構(gòu)域影響可分裂細(xì)胞的增殖；(3)PTB結(jié)構(gòu)域?qū)煞至鸭?xì)胞周期的影響可能不經(jīng)過CH1介導(dǎo)的信號通路，但CH1結(jié)構(gòu)域的存在可以明顯提高SH2結(jié)構(gòu)域?qū)煞至鸭?xì)胞的增殖的促進(jìn)作用。在