基于隨機突變體構建的克羅諾桿菌逆境相關基因的發(fā)掘研究.pdf

1、克羅諾桿菌是一種兼性厭氧革蘭氏陰性菌，通常以嬰幼兒配方奶粉為主要感染渠道，對嬰幼兒的身體健康造成嚴重危害。該菌可引起新生兒細菌性腦膜炎、壞死性小腸結腸炎和菌血癥等，且致死率高達40％-80％。克羅諾桿菌分布廣泛且嚴重危害某些特定人群（如新生兒）生命而被廣泛關注?？肆_諾桿菌的抗逆性很強，而目前對克羅諾桿菌抗逆性的相關基因研究鮮有報道。
　　本課題以丙二酸鹽克羅諾桿菌野生株為主要研究對象，通過質粒結合轉移的方法構建克羅諾桿菌的突變體庫

2、。基于突變株和野生株在不同逆境脅迫下（滲透壓脅迫、氧化應激脅迫、干燥脅迫、酸脅迫）生長情況，篩選出具有代表性的不同逆境耐受突變株;通過隨機PCR反應及數(shù)據(jù)庫比對確定其突變位點。在此基礎上，開展結晶紫染色測量突變株和野生株生物膜形成能力實驗研究，并借助激光共聚焦和掃描電子顯微鏡表征逆境脅迫下野生株和突變株的生物膜微觀變化。結果表明，1.滲透壓脅迫相關因子包括:內膜蛋白YhjD、鉀離子外流蛋白KefA、肽基輔氨酰異構酶、半胱氨酸-tRNA復

3、合結構脫?；?、寡聚半乳酸裂解酶;2.干燥脅迫相關因子包括:葡萄糖-6-磷酸異構酶、糖基水解酶、海藻糖-6-磷酸合酶、外膜蛋白A、碳磷裂解酶復合物亞基團;3.氧化應激脅迫相關因子包括:泛酰酸激酶、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、丙酮酸激酶、磷脂酶A、丙氨酸消旋酶2、鐵離子轉運蛋白A、硫氧還蛋白2和谷氧還蛋白3;4.酸脅迫相關基因包括:葡萄糖基轉移酶MdoH、胞外絲氨酸蛋白酶、硫酸鹽轉運體、磷酸鹽轉運體亞基，并且發(fā)現(xiàn)除了糖基水解酶之外，其他突變株