20373.阪崎克羅諾桿菌毒力相關基因的篩選鑒定

1、分類號：Q781密級：(秘密、機密、絕密)學校代碼：10057研究生學號：2009841014阪崎克羅諾桿菌毒力相關基因的篩選鑒定SelectionandIdentifitionofAPutativeVirulence—AssociatedGeneofCronobaterSakazakii專業(yè)名稱：生物化學與分子生物學指導教師姓名：張燕教授研究生姓名：徐桂香申請學位級別：理學碩士論文提交同期：2012年1月論文課題來源：國家自然科學基金

2、項目(20905058，31071547)學位授予單位：天津科技大學摘要阪崎克羅若桿菌(Cronobatersakazakii)是一種條件致病菌，能在人和動物的腸道內(nèi)寄生的一種無芽孢的革蘭氏陰性桿菌。這一致病菌能導致各個年齡段的人感染，對新生兒的威脅較大，能引起新生兒腦膜炎，茵血癥和蟛i死性小腸結(jié)腸炎，死亡率達40％一80％。此外，還能引起成人的局部感染、骨髓炎和菌血癥等。目6訂的研究顯示，阪崎克歲諾桿菌的毒力具有多樣性，乳鼠灌胃實驗表

3、明不同阪崎克歲諾桿菌菌株之問的毒力存在明顯差異。雖然阪崎克羅諾桿菌已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的焦點，但是其致病機制仍然不夠清楚。為了獲得阪崎克歲諾桿菌的毒力相關基因，本研究利用腹腔注射ICR小鼠對24株食源性分離株的毒力進行了檢測，根據(jù)致死時問判斷不同菌株的毒力大小。從中選擇毒力最高和毒力最低的菌株，利用抑制性雜交(SSH)篩選其差異基因，結(jié)果共獲得7個差異片段，測序后將結(jié)果輸入NCBI數(shù)據(jù)庫進行BlastN與BlastX比對分析，確定基因性質(zhì)

4、。其中基因papC編碼菌毛亞基轉(zhuǎn)運與菌毛組裝干目關蛋白，可能與阪崎克羅瀟桿菌的致病性有關。為了進。步確認papC基因的毒力相關性，利用基因敲除I司源重組技術(shù)構(gòu)建了papC基因缺失突變株zlpapC，通過PCR技術(shù)對缺失突變株進行了確認。將108CFU野生株與突變株Apap(7分別腹腔注射出生三天的SD乳鼠，汜錄乳鼠死亡時問，結(jié)果顯示野生株的平均致夕匕時|日J為65小時，而突變株的平均致死時I刈為9625小時，@apC突變株毒力明顯降低。