高血壓心肌損傷過程中自然殺傷T細胞的變化及其在心肌纖維化中的作用.pdf

1、目的:探討自然殺傷T細胞(naturekillerTcells,NKT)在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的高血壓心肌損傷過程中的變化及其在心肌纖維化中的作用。
　　 方法:6-8周齡的C57BL/6雄性小鼠，隨機分為4組:對照組、血管緊張素Ⅱ組（3d和7d）組、血管緊張素Ⅱ+NKT細胞激動劑（α-Galcer3d和7d）組和NKT細胞激動劑（α-Galcer3d和7d）組。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ，灌注速度1500ng

2、/kg)，灌注1、3和7天。流式細胞儀檢測高血壓心肌損傷中1d、3d和7d時NKT細胞數(shù)目的變化;聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組織化學(xué)測定活化的NKT細胞的功能;HE染色檢測炎癥細胞浸潤;Masson染色評價心肌纖維化程度。
　　 結(jié)果:應(yīng)用雙色的免疫熒光檢測細胞表面的表型，CD3和NK1.1兩種染色標記NKT細胞，AngⅡ處理后，1dNKT細胞逐漸增加，與對照組相比(0.99±0.58vs2.81±0.61，P＜0.05)，3d升至最高

3、(8.18±2.94)與對照組相比增加7.26％（0.99±0.58vs8.18±2.94，P＜0.05），7d后(0.99±0.58vs4.59±0.70，P＜0.05)逐漸降低，但仍高于正常水平，給予NKT細胞激動劑(α-Galcer)后未進一步增加AngⅡ誘導(dǎo)的數(shù)目的增加。realtimePCR檢測心肌組織中細胞因子水平（L-4，IL-10及IFN-γ），與對照組相比，AngⅡ處理1d后，IL-4，IL-10和IFN-γ分別增加了

4、3.47％（1.00±1.01對照組vs4.47±0.82AngⅡ組，P＜0.05）、2.1％(1.00±0.06對照組vs3.10±0.01AngⅡ組，P＜0.05)和3.63％（1.01±0.15對照組vs4.63±1.02AngⅡ組，P＜0.05）;AngⅡ處理3d后，IL-4，IL-10和IFN-γ分別增加了7.36％（1.00±1.01對照組vs8.36±0.01AngⅡ組，P＜0.05）、4.91％（1.00±0.06對照組

5、vs5.91±0.01AngⅡ組，P＜0.05）和2.24％（1.01±0.15對照組vs3.24±0.04AngⅡ組，P＜0.05）;AngⅡ處理7d后，IL-4，IL-10和IFN-γ分別增加了2.95％（1.00±1.01對照組vs3.95±0.20AngⅡ組，P＜0.05）、1.62％（1.00±0.06對照組vs2.62±0.01AngⅡ組，P＜0.05）和2.57％（1.01±0.15對照組vs3.57±0.04AngⅡ組，

6、P＜0.05），給予NKT細胞激動劑(α-Galcer)后進一步增加AngⅡ誘導(dǎo)的NKT細胞活化的細胞因子（IL-4、IL-10及IFN-γ）的分泌，AngⅡ處理7d，IL-4、IL-10及IFN-γ分泌（2.84±0.29AngⅡ組vs6.64±1.51AngⅡ+α-Galcer組、2.75±0.09AngⅡ組vs3.71±0.68AngⅡ+α-Galcer組、2.60±0.98AngⅡ組vs6.63±0.20AngⅡ+α-Galce

7、r組，P＜0.05）;給予NKT細胞激動劑(α-Galcer)后進一步增加AngⅡ誘導(dǎo)的血壓升高趨勢（147.84±6.44vs157.68±6.46，P＞0.05），無統(tǒng)計學(xué)差異;HE染色，AngⅡ+α-Galcer組和AngⅡ組炎癥細胞浸潤程度均明顯高于對照組，α-Galcer明顯增加AngⅡ誘導(dǎo)的心肌組織炎癥細胞浸潤，誘導(dǎo)促炎因子（TNFα，IL-1和MCP-1）mRNA水平表達增加。realtimePCR結(jié)果證實AngⅡ組IL-

8、6（3.19±0.66AngⅡ組vs1.00±0.19對照組，P＜0.05）、TNF-α（8.50±2.36AngⅡ組vs1.00±0.33對照組，P＜0.05）和MCP-1（2.19±0.07AngⅡ組vs1.00±0.16對照組，P＜0.05）較對照組均明顯升高，給予α-Galcer后進一步增加AngⅡIL-6（3.19±0.66AngⅡ組vs17.90±1.37AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05）、TNF-α（8.50±2

9、.36AngⅡ組vs11.89±3.54AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05）和MCP-1(2.19±0.07AngⅡ組vs4.38±0.26AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05)的生成;Masson染色，AngⅡ+α-Galcer組和AngⅡ心肌纖維化程度均明顯高于對照組，α-Galcer明顯增加AngⅡ誘導(dǎo)的心肌纖維化程度，升高了促纖維化因子(collagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、TIMP-1)的水平。realtimePC

10、R結(jié)果證實，與對照組比較，AngⅡ組collagenⅠ（16.24±1.87vs1.00±0.27，P＜0.05）、collagenⅢⅠ(17.40±7.64vs1.00±0.80,P＜0.05)、TIMP-1(13.85±6.35vs1.03±0.19,P＜0.05)及TGF-β(2.39±0.30vs1.00±0.14,P＜0.05)、MMP9(4.54±0.79vs0.98±0.24,P＜0.05)的mRNA水平均明顯升高，給予α

11、-Galcer后進一步增加AngⅡ組collagenⅠ（16.24±1.87AngⅡ組vs35.45±2.55AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05）、collagenⅢ(17.40±7.64AngⅡ組vs36.43±3.84AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05)、TIMP-1(13.85±6.35AngⅡ組vs46.85±2.45AngⅡ+α-Galcer組，P＜0.05)及TGF-β（2.39±0.30AngⅡ組vs5.5