微小RNA-9在心肌纖維化中的作用及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景和目的：心肌纖維化是許多心血管疾病的終末期共同表現(xiàn)，是以心肌成纖維細(xì)胞的過度增殖及I型、III型膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)的過量沉積為特征。目前抑制心肌纖維化的主要方法是使用 RAAS系統(tǒng)抑制劑如 ACEI和 ARB類藥物等。MiRNA是真核細(xì)胞內(nèi)一類具有負(fù)性調(diào)控作用的小RNA，通過與其靶基因的特異性結(jié)合，抑制基因的表達(dá)。MiRNA參與了真核生物基因表達(dá)的幾乎全部過程，越來越多的研究表明miRNA在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要

2、作用。本研究主要探討微小RNA-9（miRNA-9，miR-9）在心肌纖維化中的作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：PDGF-BB（20 ng/ml、50 ng/ml）或血清(10％)處理大鼠新生心肌成纖維細(xì)胞48小時(shí)，采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)各組大鼠心肌成纖維細(xì)胞中 miRNA-9的表達(dá)量。MiRNA-9、miRNA-9+ miRNA-9抑制劑（anti-miR9）分別轉(zhuǎn)染大鼠心肌成纖維細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)

3、細(xì)胞增殖活性檢測(cè)法（MTT）、qRT-PCR、蛋白免疫印跡法（Western blotting）分別檢測(cè)各組大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖率、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體-β（PDGFR-β）及 I型、III型膠原蛋白（collagen I、collagen III）表達(dá)量。PDGFR-β過表達(dá)質(zhì)粒、PDGFR-β過表達(dá)質(zhì)粒+ miRNA-9分別轉(zhuǎn)染大鼠心肌成纖維細(xì)胞，檢測(cè)各組 PDGFR-β及collagen I、collagen III表達(dá)量。S

4、iPDGFR-β轉(zhuǎn)染大鼠心臟心肌成纖維細(xì)胞，檢測(cè)PDGFR-β及collagen I、collagen III表達(dá)量。PDGFR-β雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒+ miRNA-9轉(zhuǎn)染大鼠心肌成纖維細(xì)胞，檢測(cè)熒光素酶活性。
　　結(jié)果：PDGF-BB或血清處理大鼠心肌成纖維細(xì)胞48小時(shí)后，miRNA-9表達(dá)量較對(duì)照組明顯下調(diào)（P<0.05）。MiRNA-9組細(xì)胞增殖率。PDGFR-β、collagen I、collagen III mRNA

5、及蛋白表達(dá)量較對(duì)照組均明顯下調(diào)（P<0.05）。miR-9+miRNA-9抑制劑組上述指標(biāo)較對(duì)照組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。PDGFR-β過表達(dá)質(zhì)粒組 PDGFR-β及 collagen I、collagen III mRNA較對(duì)照組明顯上調(diào)（P<0.05），較PDGFR-β過表達(dá)質(zhì)粒+miRNA-9組變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SiPDGFR-β組PDGFR-β、collagen I、collagen III mRNA及