SV40ST使良性永生化前列腺上皮細胞獲得TRAIL敏感表型的機制研究.pdf

1、第一部分：良性永生化前列腺上皮細胞LH/LE對TRAIL不同敏感性及其機制研究
　　 目的：腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）可選擇性誘導某些腫瘤細胞凋亡，而對絕大多數正常細胞無毒性作用，這一特性使TRAIL在抗腫瘤治療中具有很好的應用前景。本研究是為了明確良性永生化前列腺上皮細胞LH/LE對TRAIL的不同敏

2、感性及其機制。
　　 方法：正常前列腺上皮細胞通過導入猿猴空泡病毒40（SV40）大T抗原和端粒酶末端轉移酶催化亞單位（hTERT），使其永生化，得到LH細胞；在這基礎上又導入SV40小T抗原片段，得到LE細胞。TRAIL作用于這兩種細胞后，MTT法檢測細胞活力，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變和流式細胞術檢測細胞凋亡狀態(tài)。Western blot檢測PP2A和c-Fos的蛋白表達。TRAIL處理LH和LE細胞后檢測PP2A酶活性。S

3、PSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：LH細胞對TRAIL耐受，LE細胞對TRAIL敏感。TRAIL作用后大約45％的LE細胞發(fā)生凋亡，而TRAIL作用后的LH細胞發(fā)生凋亡的比例很低。Western blot結果顯示，PP2A蛋白表達量在LH細胞與LE細胞間未見明顯差異，而PP2A的酶活性在LH細胞中明顯高于LE；c-Fos蛋白表達在LE細胞中明顯高于LH細胞。
　　 結論：SV40ST賦予了良性永生化前列腺

4、上皮細胞LE細胞TRAIL敏感性表型。
　　 第二部分：奧克代酸誘導TRAIL耐受的良性永生化前列腺上皮細胞LH細胞獲得TRAIL敏感表型的研究
　　 目的：研究奧克代酸（Okadaic acid，OA）誘導TRAIL耐受的LH細胞獲得TRAIL敏感性及其機制。
　　 方法：蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制劑OA處理TRAIL耐受的良性永生化前列腺上皮細胞LH細胞后，TRAIL作用于處理組和對照組，MTT法檢測細胞

5、活力，細胞形態(tài)學和流式細胞術染色檢測細胞凋亡狀態(tài)。Western blot檢測PP2A和c-Fos的蛋白表達。酶活性試劑盒檢測PP2A酶活性。用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：顯示經OA誘導后的LH細胞對TRAIL敏感，細胞形態(tài)學可見大量的細胞發(fā)生凋亡，流式細胞檢測顯示經OA誘導TRAIL作用后的LH細胞有大約32％的細胞發(fā)生凋亡，而未經OA誘導TRAIL作用后的LH細胞中，凋亡細胞的比例很低。Western b

6、lot結果顯示，經OA誘導后LH細胞中PP2A蛋白表達量明顯減少，PP2A酶活性明顯下降，而c-Fos蛋白表達量經OA誘導后明顯增多。
　　 結論：OA誘導TRAIL耐受的LH細胞獲得TRAIL敏感表型。
　　 第三部分：A-Fos逆轉奧克代酸誘導TRAIL耐受的LH細胞向TRAIL敏感轉化的研究
　　 目的：明確c-Fos在良性永生化前列腺上皮細胞對TRAIL敏感性中的作用及其機制。
　　 方法：A-F

7、os質粒轉染LH細胞，奧克代酸（Okadaic acid，OA）處理后，TRAIL作用于各實驗組，MTT法檢測細胞活力，細胞形態(tài)學和流式細胞術檢測細胞凋亡狀態(tài)。Western blot檢測PP2A和c-Fos的蛋白表達。用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：MTT法檢測細胞活力顯示，經OA誘導后的LH細胞對TRAIL敏感，轉染A-Fos質粒的LH細胞雖然經OA誘導但對TRAIL敏感性下降；流式細胞術顯示：未經OA誘導

8、TRAIL作用后的LH細胞中凋亡細胞的比例很低，經OA誘導TRAIL作用后的LH細胞后有大約51％的細胞發(fā)生凋亡；而經OA誘導TRAIL作用后，轉染A-Fos質粒的LH細胞的細胞凋亡率低于未轉染A-Fos質粒的LH細胞；Western blot結果顯示，經OA誘導后未轉染組和A-Fos轉染組中PP2A蛋白表達量明顯減少，而c-Fos蛋白表達量增多；且A-Fos轉染組中c-Fos蛋白表達量低于未轉染組。
　　 結論：OA誘導TRA