池蝶蚌親環(huán)蛋白A(CyPA)基因特異性表達(dá)及多克隆抗體制備.pdf

1、池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原產(chǎn)于日本滋賀縣琵琶湖,是日本特有的淡水貝類養(yǎng)殖品種。它隸屬于軟體動(dòng)物門、瓣鰓綱、蚌科、與三角帆蚌一樣為帆蚌屬。與其他淡水珍珠貝類相較,池蝶蚌擁有更好的抗病能力和育珠性能。
　　 親環(huán)蛋白(Cyclophilins CyPs)是一種廣泛存在于各種生物中的組成型蛋白,具有多種生物學(xué)功能。其最重要的兩個(gè)生物學(xué)功能:一是具有肽基脯氨酸順／反異構(gòu)酶(peptidyl-prolyl cis

2、-trans isomerases,PPIase)活性能催化蛋白質(zhì)折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)過程并起著分子伴侶作用；二是具有免疫抑制功能,在體內(nèi)能介導(dǎo)T細(xì)胞進(jìn)行免疫抑制。CyPA是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的CyP家族蛋白[2]。最新研究表明CyPA可能在某些生物中具有免疫應(yīng)激功能。本研究依據(jù)從嗜水氣單胞桿菌誘導(dǎo)的池蝶蚌血細(xì)胞cDNA文庫里獲得了池蝶蚌CyPA基因(以下簡稱HsCypA)cDNA全長,對CypA基因在池蝶蚌中的表達(dá)特征和是否存在免疫應(yīng)激功能進(jìn)行初步的

3、探索,為研究CyPA基因在淡水貝類中的功能打下基礎(chǔ),為研究無脊椎動(dòng)物的免疫機(jī)制提供一個(gè)新的方向。主要研究內(nèi)容如下:
　　 1、利用Real-Time PCR分析了池蝶蚌CyPA基因mRNA在池蝶蚌血液、心、鰓、腸、肝、腎、斧足、性腺等組織及各年齡血淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示HsCyPA基因在各組織中均有表達(dá),其中在肝臟和性腺中表達(dá)量最高,在腸和血淋巴中最低；在各年齡中僅在幼齡中的表達(dá)量略高于成年蚌,這可能是幼齡蚌血淋巴細(xì)胞中

4、的蛋白質(zhì)合成更加豐富的緣故。
　　 2、利用Real-Time PCR技術(shù)對嗜水氣單胞桿菌誘導(dǎo)刺激后池蝶蚌肝臟、性腺和血液中CyPA基因mRNA的表達(dá)量進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)在肝臟和性腺中CyPA在誘導(dǎo)4h出現(xiàn)一個(gè)表達(dá)峰,8h后開始下降,這表明了HsCyPA基因參與了池蝶蚌的免疫系統(tǒng)的應(yīng)激反應(yīng)。
　　 3、利用PET-32a(+)表達(dá)載體,依據(jù)HsCyPA基因cDNA的序列,構(gòu)建了含有完整開放閱讀框(ORF)的表達(dá)載體并進(jìn)行原