與牙周膜成纖維細(xì)胞間接共培養(yǎng)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響.pdf

1、【實驗?zāi)康摹?br>　　本實驗旨在觀察通過與牙周膜成纖維細(xì)胞（Periodontal ligament fibroblasts，PDLFs）間接共培養(yǎng)，誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）向PDLFs分化的可行性。初步探討PDLFs誘導(dǎo)BMSCs分化的機(jī)制：細(xì)胞間接觸是否為必要條件，如果不接觸能否誘導(dǎo)BMSCs定向分化？從而為BMSCs在體內(nèi)分化提供一定的理論依據(jù)，

2、為BMSCs作為牙周組織工程種子細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化條件提供一條新的思路。
　　【內(nèi)容及方法】
　　采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs，通過觀察細(xì)胞形態(tài)及生長特性、生長曲線、成骨及成脂肪誘導(dǎo)對其進(jìn)行鑒定；酶消化法結(jié)合組織塊法培養(yǎng)大鼠PDLFs，通過波形絲蛋白、角蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色及礦化誘導(dǎo)進(jìn)行鑒定。建立間接共培養(yǎng)模型，設(shè)間接共培養(yǎng)BMSCs組（將BMSCs與PDLFs按1：1比例進(jìn)行體外非接觸式共培養(yǎng)），并設(shè)單獨(dú)培養(yǎng)BMSC

3、s組與單獨(dú)培養(yǎng)PDLFs組為對照組。分別于共培養(yǎng)后的第3、5天，檢測以上3組細(xì)胞的堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）活性。于共培養(yǎng)第14天，終止培養(yǎng)。用半定量RT-PCR方法檢測3組細(xì)胞的骨鈣素（Osteocalcin，OCN）、骨涎蛋白（Bone sialoprotein，BSP）、Ⅲ型膠原（Collagen type Ⅲ，COLⅢ）、Runx2的mRNA表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　間接共培養(yǎng)

4、后BMSCs被誘導(dǎo)為牙周膜成纖維樣細(xì)胞，表現(xiàn)出一些類似PDLFs的性質(zhì)，包括ALP活性的降低，OCN、COLⅢ、Runx2mRNA表達(dá)水平的升高以及BSPmRNA表達(dá)水平的降低。間接共培養(yǎng)組BMSCs的各檢測指標(biāo)與單獨(dú)培養(yǎng)PDLFs組無統(tǒng)計學(xué)差別，與單獨(dú)培養(yǎng)BMSCs組有統(tǒng)計學(xué)差別。
　　【結(jié)論】
　　通過體外非接觸式共培養(yǎng)也可以誘導(dǎo)BMSCs向PDLFs分化。細(xì)胞間直接接觸反應(yīng)并非誘導(dǎo)BMSCs向PDLFs分化的必要條件，