對蝦integrin介導(dǎo)白斑桿狀病毒感染以及日本對蝦凝集素表達(dá)及功能研究.pdf

1、對蝦是主要的水產(chǎn)養(yǎng)殖對象，爆發(fā)性疾病的持續(xù)發(fā)生給對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失，對蝦白斑桿狀病毒W(wǎng)SSV是對蝦的主要病原。宿主細(xì)胞受體及免疫因子與病毒的相互識(shí)別、相互作用對病毒的感染及宿主防御致關(guān)重要。迄今尚無有關(guān)WSSV與對蝦細(xì)胞受體、免疫因子間相互作用的文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 粘合素integrin是細(xì)胞表面的主要受體，介導(dǎo)多種病毒尤其是具有囊膜的病毒的感染。WSSV多種結(jié)構(gòu)蛋白含有integrin結(jié)合配基。本文對對蝦β-integri

2、n細(xì)胞膜外功能區(qū)進(jìn)行了克隆表達(dá)、純化。以純化的integrin為Bait對WSSV基因組噬菌體展示庫進(jìn)行篩選，獲得四種克隆子。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明其中三種與integrin能夠結(jié)合。這三種克隆子分別表達(dá)WSSV的膜蛋白Vp187(wsv209)，vp136A(wsv271)和ORF wsv049。內(nèi)源蛋白的免疫共沉淀進(jìn)一步證明了天然integrin與VP187間的結(jié)合。Vp187含有兩個(gè)integrin的結(jié)合基序(-RGD and KGD

3、)，vp136A含有一個(gè)RGD，wsv049含有一個(gè)DLIRL。人工感染實(shí)驗(yàn)中可溶性integrin、integrin抗體、RGD能夠抑制WSSV感染。sRNA干擾integrin表達(dá)時(shí)對蝦及對蝦血淋巴細(xì)胞對WSSV的易感性降低。結(jié)果表明integrin參與了WSSV的感染，這是首次發(fā)現(xiàn)的與WSSV感染有關(guān)的對蝦細(xì)胞受體。
　　 無脊椎動(dòng)物缺乏免疫球蛋白等高度特異性免疫因子，為了保護(hù)自身必須形成強(qiáng)大的能夠識(shí)別多種多樣異物的機(jī)制，

4、因此對其免疫識(shí)別因子的尋找一直是國內(nèi)外許多學(xué)者的研究重點(diǎn)之一。但迄今尚無對蝦防御因子與病毒識(shí)別、相互作用的報(bào)道。凝集素品種繁多、數(shù)目龐大、無處不在。它在對外來入侵活動(dòng)進(jìn)行的異物識(shí)別、防御、凝集、吞噬、包囊及其隨后的創(chuàng)傷修復(fù)等一系列反應(yīng)中，起著重要作用。迄今只有少數(shù)文獻(xiàn)對個(gè)別對蝦凝集素進(jìn)行研究報(bào)道。本文用WSSV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP26、VP28、VP281、VP466和對蝦細(xì)胞受體integrin篩選對蝦cDNA噬菌體展示庫，并由此獲得多種

5、具有CTLD(C-type lectindomain)結(jié)構(gòu)的蛋白cDNA序列。分析了該類對蝦免疫因子的cDNA序列多樣性，并對其進(jìn)行了表達(dá)純化及功能分析。首次在無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)凝集素與病毒及細(xì)胞受體間的作用，首次發(fā)現(xiàn)對蝦凝集素能阻斷WSSV侵入對蝦血淋巴細(xì)胞，該結(jié)果與脊椎動(dòng)物中凝集素能通過阻斷細(xì)胞受體與病毒接觸、結(jié)合而阻止病原入侵的理論一致。首次發(fā)現(xiàn)WSSV膜蛋白VP281對脊椎動(dòng)物細(xì)胞的凝集活性、發(fā)現(xiàn)病毒結(jié)構(gòu)蛋白、細(xì)胞受體integr