不同姬松茸提取物對(duì)對(duì)蝦白斑病毒感染能力的影響研究.pdf

1、目前，對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展已深受對(duì)蝦病毒病的影響，而對(duì)蝦白斑病毒(WSSV)病又是對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的病害之一，研究對(duì)蝦白斑病毒病具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。本文利用姬松茸提取物在體外條件下對(duì)日本對(duì)蝦原代淋巴細(xì)胞抵抗WSSV感染的影響作用進(jìn)行了研究，旨在查清姬松茸提取物對(duì)WSSV感染的拮抗作用，為篩選出高效的抗WSSV活性物質(zhì)、預(yù)防對(duì)蝦白斑病毒病奠定基礎(chǔ)。 為了獲得實(shí)驗(yàn)用WSSV樣品，本文首先通過(guò)注射WSSV粗提液感染活體日本對(duì)蝦，

2、經(jīng)PCR檢測(cè)對(duì)蝦確實(shí)被WSSV感染后，從病蝦的心臟、淋巴組織和鰓分離制備WSSV粗提液。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WSSV感染后的對(duì)蝦出現(xiàn)體紅、活動(dòng)力下降等癥狀，于第7天全部死亡；經(jīng)PCR檢測(cè)，WSSV的感染率為85％。 為了在體外研究姬松茸提取物的抗WSSV活性，本文起動(dòng)了日本對(duì)蝦淋巴細(xì)胞的原代培養(yǎng)，并分別在4、25和60℃的溫度下制備出姬松茸的水提物。WSSV分別與0.05％、0.1％和0.15％濃度的姬松茸水提物作用1h后，感染對(duì)蝦原代培

3、養(yǎng)淋巴細(xì)胞。結(jié)果表明：在體外WSSV可以侵染對(duì)蝦原代淋巴細(xì)胞。三種不同的溫度下制備的姬松茸水提物在不同程度上可以抑制日本對(duì)蝦淋巴細(xì)胞因感染W(wǎng)SSV而產(chǎn)生的致細(xì)胞病變(CPE)。根據(jù)PCR對(duì)WSSV的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在體外三種姬松茸水提物不能完全阻止WSSV的吸附和對(duì)細(xì)胞的侵染。0.1％的25℃和60℃制備姬松茸水提物的實(shí)驗(yàn)組較其他實(shí)驗(yàn)組對(duì)WSSV的侵染有較高的抑制作用。 通過(guò)不同濃度酒精對(duì)60℃制備姬松茸水提物進(jìn)一步的分離，得到5種酒

4、精沉淀樣品。通過(guò)這5種產(chǎn)物對(duì)日本對(duì)蝦淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)用培養(yǎng)液中添加2mg/mL的酒精沉淀物對(duì)日本對(duì)蝦淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)24h內(nèi)對(duì)日本對(duì)蝦淋巴細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性，培養(yǎng)72h后，17％酒精沉淀的提取物實(shí)驗(yàn)組有少量的細(xì)胞收縮變圓脫壁，50％酒精沉淀的提取物實(shí)驗(yàn)組部分細(xì)胞發(fā)生收縮WSSV的攻毒試驗(yàn)室中，隨著病毒液的稀釋?zhuān)?xì)胞因WSSV感染產(chǎn)生的CPE減弱，PCR檢測(cè)當(dāng)病毒液稀釋30倍時(shí)，姬松茸水溶液經(jīng)17％、29％和38％酒精沉淀得到的