JNK與Smad信號(hào)通路在小鼠肺纖維化中相互作用的研究及對(duì)Ⅰ型膠原表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　利用Bleomycin制備的野生型雄性的健康的C57BL/6小鼠肺臟器官纖維化模型，探討JNK與Smad這兩條信號(hào)通路在肺纖維化的衍變過(guò)程之中的彼此關(guān)聯(lián)及二者對(duì)Ⅰ型膠原蛋白的影響。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)中我們選取雄性的、野生型、健康的C57BL/6實(shí)驗(yàn)型小鼠96只，將其隨機(jī)平均分成四個(gè)組，分別是正常對(duì)照組、模型組、JNK阻斷組、p-Smad3阻斷組，為了便于統(tǒng)計(jì)對(duì)應(yīng)的簡(jiǎn)寫為N組、M組、SP組、SB組，每組各

2、24只。除了正常對(duì)照組之外的其它三個(gè)組的小鼠模型，我們使用氣管內(nèi)滴注博萊霉素（Bleomycin， BLM）注射液的方法3.5mg/Kg，誘導(dǎo)小鼠模型的構(gòu)建，于造模完成后給予相應(yīng)藥物， N組給予等劑量的生理鹽水。模型制備完成之后的第7天、第14天、第28天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，在每個(gè)組內(nèi)隨機(jī)抽樣的方式取出8只小鼠并處死，然后取組織病理切片后，行蘇木素-伊紅（Hematoxylin and eosin，HE）及Masson染色，完成后鏡下比較模型的

3、組織切片肺泡炎性變化情況及纖維化程度；采用堿性水解法對(duì)小鼠的肺臟組織之中的羥脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）的含量進(jìn)行檢測(cè)；采用免疫組化法對(duì)肺組織Ⅰ型膠原、磷酸化JNK及磷酸化Smad蛋白的含量進(jìn)行測(cè)定，各組間測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果：
　　在M組肺泡炎癥程度相對(duì)十分明顯出現(xiàn)在第7天這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，在第28天這個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)肺臟的纖維化程度顯著；Hyp含量與時(shí)間呈正比例關(guān)系，當(dāng)?shù)?8天時(shí)Hyp的含量最高。模型組觀察

4、及檢測(cè)肺泡炎性改變的情況及纖維化程度結(jié)果顯示均比SB及SP組的明顯加重；第14、28天Hyp含量稍降低，Ⅰ型膠原蛋白、磷酸化的JNK蛋白及磷酸化的Smad蛋白的表達(dá)有所減少(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　JNK及Smad信號(hào)通路與肺纖維化的形成和發(fā)展緊密相關(guān)，且兩條途徑在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1作用下誘導(dǎo)的ECM過(guò)度積聚過(guò)程之中發(fā)揮了重要的作用；JNK的活化會(huì)增加Smad3蛋白的磷酸化，而Smad信號(hào)通路的激活也反過(guò)來(lái)促進(jìn)了JN