益氣解表法調(diào)控TLR4-NFκB信號通路影響B(tài)D-2表達機制的相關性研究.pdf

1、目的：探索益氣解表法代表方參蘇飲調(diào)控TLR4-NFκB信號通路影響β-防御素-2表達的機制以及與解表法的相關性。
　　方法：1.選擇雄性SD大鼠，灌胃給予參蘇飲及其拆方藥液，心臟采血制備含藥血清；
　　2.傳代培養(yǎng)人支氣管上皮細胞（16HBE）；
　　3.LPS（1mg/L）刺激16HBE后不同時間點（3h、6h、12h、24h）測定細胞增殖活性及培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-8含量，建立16HBE炎癥模型；
　

2、　4.給藥前用PDTC預處理30min，采用RT-PCR法檢測給藥后不同時間點（0.5h、1h、3h、5h、8h）細胞hBD-2mRNA的表達情況；
　　5.給藥前用Anti-HumanTLR4預處理1h，采用RT-PCR法檢測給藥后不同時間點（0.5h、1h、3h、5h、8h）細胞NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA的表達情況。
　　結果：1.成功培養(yǎng)了人支氣管上皮細胞（16HBE）16HBE細胞為多邊形，形態(tài)不規(guī)則

3、，呈鋪路石樣單層貼壁生長；一般3～5天傳代一次，3～4h開始貼壁，進而出現(xiàn)分裂相，分裂呈團簇狀并逐漸拉網(wǎng)連接成片。
　　2.成功建立了16HBE炎癥模型LPS（1mg/L）刺激細胞12h時，細胞增殖較快且上清液中IL-8及TNF-α含量較正常對照組均有顯著性差異（P<0.01）。
　　3.NFκB在參蘇飲誘導炎癥16HBE表達hBD-2mRNA中的作用PDTC阻斷NFκB后，與模型組比較，全方組、益氣解表組hBD-2mRNA

4、相對表達量僅在1h顯著性升高（P<0.05）；其余均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　4.TLR4在參蘇飲誘導炎癥16HBE表達hBD-2mRNA中的作用
　　Anti-HumanCD284阻斷TLR4后，與模型組比較：全方組NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA相對表達量僅在5h顯著性升高（P<0.05）；益氣解表組NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA相對表達量僅在3h顯著性升高（P<0.05）；其余均無統(tǒng)計學