新的GATA1活性調控分子的作用研究.pdf

1、GATA1是調控造血干細胞向紅系分化發(fā)育的關鍵轉錄因子,并在巨噬細胞、嗜酸細胞、肥大細胞的分化和形成過程中發(fā)揮重要作用。多種蛋白質可與GATA1相互作用形成不同的復合體,通過調控其活性,進而選擇性調控靶基因表達。對GATA1新的活性調控分子的研究可望揭示GATA1調控HSC定向分化中的新機制。本實驗室前期利用免疫共沉淀技術、級聯(lián)質譜技術對GATA1相互作用蛋白質進行了篩選和鑒定,獲得兩個相互作用蛋白質THAP11和EDAG。
　　

2、THAP11屬于THAP家族的新成員,該家族蛋白廣泛參與細胞生長、增殖、染色體重塑及細胞分化等。目前對THAP11的研究報道較少,對其功能的研究尚不深入。研究表明THAP11是一種細胞生長抑制因子,THAP11可通過結合c-Myc啟動子,抑制其活性,并進而抑制細胞生長增殖。對THAP11小鼠同源蛋白Ronin的研究表明:該基因敲除可導致胚胎致死,過表達Ronin可促進ES細胞增殖,卻并不發(fā)生分化。ChIP檢測發(fā)現(xiàn)Ronin可與HCF-1

3、相互作用,結合在多種基因的啟動子區(qū),這些基因參與了細胞生長、代謝、分化及mRNA剪接等。以上研究表明THAP11是參與細胞生長、ES細胞增殖分化的重要因子,但對其在造血發(fā)育分化中的作用尚無報道。
　　紅系分化相關基因EDAG(Erythroid Differentiation Associated Gene)是實驗室早期發(fā)現(xiàn)胎肝特異表達的新基因,研究表明EDAG可增強造血細胞的增殖能力,抑制細胞分化,并通過激活NF-kB促進細胞存

4、活,增強細胞抗凋亡能力。利用EDAG特異表達造血組織的轉基因小鼠模型,發(fā)現(xiàn)EDAG的過表達可促進髓系造血,而抑制淋巴系發(fā)生發(fā)育,小鼠出現(xiàn)典型的髓系增生綜合癥。過表達EDAG可導致32D細胞出現(xiàn)紅系表型,并上調GATA1及其靶基因的表達。這些研究結果提示EDAG參與了HSC多個譜系的定向分化。此外,還發(fā)現(xiàn)EDAG是GATA1的靶基因,在造血細胞分化過程中受到GATA1的直接調控。但目前對EDAG與GATA1的相互作用并無報道。
　　

5、本研究明確了THAP11與GATA1存在相互作用,并確定了其相互作用結構域,發(fā)現(xiàn)THAP11可以增強GATA1轉錄活性及 DNA結合能力,選擇性調控GATA1靶基因NF-E2的表達。發(fā)現(xiàn) EDAG可通過募集p300的方式增強GATA1活性,乙酰化修飾可能參與EDAG對GATA1的調控。GATA1/THAP11/EDAG三者形成復合體,并且THAP11可以拮抗EDAG對GATA1 DNA結合能力的增強作用。本論文通過對兩個新的GATA1調