溫潤通絡(luò)方防治糖尿病周圍神經(jīng)病變作用的機(jī)理研究.pdf

1、目的:以糖尿病模型大鼠為研究對象,以中醫(yī)溫潤通絡(luò)為法,通過觀察各組大鼠血糖、坐骨神經(jīng)電生理改變及坐骨神經(jīng)醛糖還原酶(AR)、Na+-K+-ATP酶、山梨醇活性變化,探討中藥溫潤通絡(luò)方對其影響,闡明其防治糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)的部分作用機(jī)制,為溫潤通絡(luò)方的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù),促進(jìn)中醫(yī)藥的發(fā)展。
　　 方法:選取健康的、體重200g-230g之間SD雄性大鼠60只用于實驗。大鼠喂養(yǎng)于18℃～22℃清潔的動物實驗室內(nèi)。正常喂養(yǎng)

2、一周后,隨機(jī)抽取10只大鼠作為正常對照組(簡稱正常組,normal group),其余50只采用鏈脲佐菌素腹腔注射造模法造模。將大鼠禁食12h后,腹腔注射1％鏈脲佐菌素檸檬酸緩沖液(檸檬酸緩沖液為0.1mmol/L,pH值4.5),按照50mg/kg腹腔內(nèi)一次注射,72小時后,取尾尖血測定血糖值,凡血糖值大于16.7mmo/L者納入實驗。正常組的10只大鼠在禁食12h后一次性腹腔注射相等容積即0.1mmol/L的檸檬酸緩沖液。將造模成功

3、的大鼠隨機(jī)分為4組:模型對照組(簡稱模型組,model group),血府逐瘀湯組(簡稱對照組,contrast group),溫潤通絡(luò)方高劑量組(簡稱高劑量組,high-dosegroup),溫潤通絡(luò)方低劑量組(簡稱低劑量組,low-dose group)。每組10只。高劑量組大鼠給于溫經(jīng)通絡(luò)方灌胃,藥量按34g/kg·d;低劑量組大鼠給于溫經(jīng)通絡(luò)方灌胃,藥量按17g/kg·d;對照組大鼠給于血府逐瘀湯灌胃,藥量按25.6g/kg·d

4、,以上3組灌胃按1ml/100g計算容量,每天上午1次。正常組和模型組給予等體積生理鹽水,每天上午灌胃1次。各組分別灌胃8周,自由進(jìn)食水,觀察各組大鼠的神態(tài)、體毛、活動、攝食飲水量、尿量等一般情況,然后麻醉固定大鼠測定其神經(jīng)傳導(dǎo)速度和潛伏期。于最后一次灌胃24h后取血用葡葡糖氧化酶法測量血糖。剖取坐骨神經(jīng)脫水、切片、HE染色,觀察其形態(tài)學(xué)變化。同時分別利用熒光分光光度法、比色法和化學(xué)法測定AR、Na+-K+-ATP酶和山梨醇的表達(dá)情況。

5、
　　 結(jié)果:
　　 1.各組大鼠的一般情況
　　 實驗前,各組大鼠一般情況良好。實驗期間,模型組大鼠表現(xiàn)為精神倦怠,毛發(fā)枯黃,活動減少,出現(xiàn)多飲多尿的癥狀,且尿液較粘,2周后這組大鼠攝食量明顯增多。隨著時間的延長,與正常組相比較,模型組大鼠多飲多食多尿癥狀顯著,體重增加緩慢后期逐漸減輕。與模型組比較,溫潤通絡(luò)方高、低劑量組和血府逐瘀湯對照組的大鼠“三多”癥狀逐漸好轉(zhuǎn),體重增加,精神狀況、自主活動也有明顯改善,其

6、中,高劑量組的大鼠在各方面改善最為明顯,外觀、精神、飲食、攝水、尿量等和正常組較接近。對照組大鼠同樣存在多飲多食,多尿,體重增加,精神不振等癥狀。與模型組比較,癥狀減輕。
　　 2.血糖情況
　　 與正常組相比,模型組大鼠血糖明顯升高,具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);高劑量組、低劑量組大鼠血糖水平與模型組比較皆降低,有顯著性差異(均P＜0.01);對照組大鼠血糖與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05);高劑量組大鼠與

7、低劑量組、對照組比較,血糖值皆降低,有統(tǒng)計學(xué)差異(均P＜0.01);低劑量組與對照組比較血糖降低有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 3.坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)變化
　　 正常組大鼠坐骨神經(jīng)可見纖維分布排列整齊,軸突髓鞘結(jié)構(gòu)清晰完整,單個纖維飽滿,鞘壁均勻,可見到Schwann細(xì)胞。與正常組比較,模型組大鼠神經(jīng)纖維排列松散紊亂,變細(xì),出現(xiàn)裂隙,密度不均勻,有斑塊狀密度下降,髓鞘空泡變性,Schwann細(xì)胞增殖,軸突萎縮甚至消失,

8、毛細(xì)血管管壁增厚,管腔不規(guī)則。高劑量組大鼠表現(xiàn)為神經(jīng)纖維較規(guī)則,密度增高,有髓神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)接近正常,可見髓鞘脫落較少,髓鞘中可見正常軸突。低劑量組、對照組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為神經(jīng)纖維腫脹,排列松散,有脫髓鞘現(xiàn)象,軸突萎縮甚至消失。
　　 4.坐骨神經(jīng)AR、Na+-K+-ATP酶、山梨醇變化
　　 與正常組比較,模型組大鼠坐骨神經(jīng)AR活性顯著升高(P＜0.01);高劑量組與模型組比較AR活性減低(P＜0.01),有統(tǒng)計學(xué)意義

9、;低劑量組、對照組與模型組大鼠比較AR無明顯差異(P＞0.05),高劑量組與低劑量組、對照組大鼠比較AR的變化有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01),低劑量組和對照組大鼠比較AR活性無明顯差異(P＞0.05)。
　　 與正常組比較,模型組大鼠坐骨神經(jīng)Na+-K+-ATP酶活性明顯減低,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);高劑量組與模型組大鼠比較Na+-K+-ATP酶活性升高(P＜0.01);高劑量組與低劑量組、對照組大鼠比較Na+-K+-A

10、TP酶活性變化有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01),低劑量組和對照組大鼠比較Na+-K+-ATP酶活性無明顯差異(P＞0.05)。
　　 與正常組比較,模型組大鼠坐骨神經(jīng)山梨醇含量明顯增加(P＜0.01);高劑量組與模型組比較山梨醇含量明顯減低(P＜0.01),具有統(tǒng)計學(xué)意義;高劑量組與低劑量組、對照組大鼠比較山梨醇含量變化有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01),低劑量組和對照組比較山梨醇含量無明顯差異(P＞0.05)。
　　 5.坐骨神

11、經(jīng)傳導(dǎo)速度、潛伏期的改變
　　 與正常組比較,模型組大鼠坐骨神經(jīng)運(yùn)動神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯減慢(P＜0.01),潛伏期延長(P＜0.01);高劑量組、低劑量組大鼠與模型組比較,神經(jīng)傳導(dǎo)速度有所增快,潛伏期有所縮短,有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.01);對照組大鼠和模型組比較,潛伏期縮短,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01),但神經(jīng)傳導(dǎo)速度無顯著變化(P＞0.05);高劑量組大鼠與低劑量組、對照組大鼠比較,兩項指標(biāo)變化顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0