一線抗結(jié)核藥物誘導(dǎo)小鼠肝損傷對(duì)肝細(xì)胞NF-κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究三種一線抗結(jié)核藥物（異煙肼、利福平、吡嗪酰胺）誘導(dǎo)小鼠肝損傷發(fā)生過(guò)程中NF-κB、IκB、TNF-α在肝組織中的表達(dá)情況，旨在揭示NF-κB在不同抗結(jié)核藥物致肝損傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的變化，對(duì)闡明不同抗結(jié)核藥物性肝損傷發(fā)生機(jī)制具有重要價(jià)值。
　　方法：SPF級(jí)昆明小鼠168只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后將所有動(dòng)物隨機(jī)分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)基線組，實(shí)驗(yàn)組分別為異煙肼組(異煙肼90mg/Kg.d)、利福平組(利福平135mg/Kg.d)、吡

2、嗪酰胺組(吡嗪酰胺315mg/Kg.d)、三藥聯(lián)合組（異煙肼+利福平+吡嗪酰胺90mg/Kg.d+135mg/Kg.d+315mg/Kg.d)。再將各實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分成5組，為3d、5d、7d、10d、15d組，每組8只，分別在灌胃3d、5d、7d、10d、15d后處死?；€組8只鼠，在開(kāi)始灌胃之前一天處死。采用摘眼球取血法收集小鼠血液，頸椎脫臼法處死小鼠取肝組織。全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量；比

3、色法檢測(cè)肝組織中丙二醛（MDA）含量和SOD酶活力；SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)肝組織中NF-κB、IκB和TNF-αmRNA表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)肝組織中NF-κB、IκB和TNF-α蛋白含量。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，時(shí)間與處理因素的效應(yīng)分析采用兩因素析因設(shè)計(jì)方差分析；單獨(dú)效應(yīng)分析時(shí)，多樣本均數(shù)的比較均采用Brown-Forsythe法，Dunnett's T3方法進(jìn)行組間兩

4、兩比較；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：肝組織病理學(xué)觀察和常用肝功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示：用藥3d后的組織切片即見(jiàn)病理改變，各用藥組小鼠血清ALT和AST水平顯著上升，提示造模成功。與基線組相比，各用藥組小鼠肝組織MDA含量逐漸升高，而SOD活力卻逐漸下降，兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；進(jìn)一步對(duì)NF-κB及其活性抑制因子IκB和炎癥相關(guān)因子TNF-α的mRNA及蛋白表達(dá)情況的分析發(fā)現(xiàn)，NF-κ

5、B、IκB和TNF-α三項(xiàng)指標(biāo)mRNA的相對(duì)表達(dá)量變化與其對(duì)應(yīng)的蛋白表達(dá)也呈現(xiàn)出明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系。隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，各組NF-κB及TNF-α的mRNA和蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)一致，對(duì)小鼠肝組織NF-κB及TNF-αmRNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行析因方差分析，不同用藥組間NF-κB及TNF-αmRNA和蛋白表達(dá)存在差異（NF-κB：F=3.110，P=0.028；F=18.551，P＜0.001。TNF-α：F=8.655，P＜0.001；F=8.21

6、8，P=0.004），不同時(shí)間點(diǎn)NF-κB及TNF-αmRNA和蛋白表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（NF-κB：F=4.944，P＜0.001；F=5.920，P＜0.001。TNF-α：F=6.171，P＜0.001；F=11.807，P＜0.001），時(shí)間與組間存在交互效應(yīng)（NF-κB：F=1.744，P=0.047；F=4.596，P＜0.001。TNF-α：F=2.756，P=0.001；F=4.495，P＜0.001）。進(jìn)而對(duì)各組各時(shí)間

7、點(diǎn)單獨(dú)效應(yīng)分析發(fā)現(xiàn)，隨灌胃時(shí)間的延長(zhǎng)異煙肼組NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表達(dá)逐漸升高，而利福平組、吡嗪酰胺組和三藥聯(lián)合組出現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，7d、10d和15d時(shí)各用藥組NF-κB蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.840，P=0.003；F=17.746，P＜0.001；F=54.020，P＜0.001），異煙肼、利福平和吡嗪酰胺組的各時(shí)間點(diǎn)間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.955，P=0.028；F=7.918，P＜0.001

8、；F=8.793，P＜0.001）。7d、10d和15d時(shí)各用藥組 TNF-α蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.630，P=0.029；F=10.773，P＜0.001；F=16.230，P＜0.001），各用藥組的各時(shí)間點(diǎn)間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.334，P＜0.001；F=9.095，P＜0.001；F=3.250，P=0.019；F=6.763，P＜0.001）；但是，各組IκB mRNA和蛋白表達(dá)與前兩者趨勢(shì)相反，對(duì)小鼠肝組

9、織IκB mRNA表達(dá)進(jìn)行析因方差分析，不同用藥組間IκB mRNA表達(dá)存在差異（F=2.797，P=0.042），不同時(shí)間點(diǎn)IκB mRNA表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.982，P=0.002），時(shí)間與組間不存在交互效應(yīng)（F=1.702，P=0.055）。進(jìn)行單獨(dú)效應(yīng)分析，結(jié)果表明15d時(shí)各用藥組IκB mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.766，P=0.026）。
　　結(jié)論：異煙肼導(dǎo)致的肝損傷發(fā)生過(guò)程中，NF-κB通路被激活