rhGH對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡和NF-κB的影響.pdf

1、研究背景:敗血癥和敗血癥休克是危重癥病人死亡的主要原因之一，病死率很高。敗血癥休克的發(fā)病機(jī)制是由于機(jī)體產(chǎn)生的過量細(xì)胞因子導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征。過量的細(xì)胞因子和細(xì)菌毒素可以誘導(dǎo)多種免疫細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致機(jī)體免疫力降低，從而加重病情的發(fā)展。 已證實細(xì)胞因子的基因和有關(guān)凋亡的基因由轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子NF-κB調(diào)控。NF-κB是一種多效轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，它可被多種刺激物激活，活化后的NF-κB由胞漿進(jìn)入胞核發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。F

2、rancisco等研究發(fā)現(xiàn)敗血癥患者NF-κ B表達(dá)明顯增加，敗血癥死亡病人體內(nèi)的NF-κB活性更高。因此，敗血癥時NF-κ B的活化程度與炎癥轉(zhuǎn)歸有密切關(guān)系。 研究發(fā)現(xiàn)重組人生長激素 (Recombinant human growth hormone，rhGH)有免疫調(diào)節(jié)能力，可對外科危重癥病人的預(yù)后產(chǎn)生積極影響。有實驗證實rhGH可降低敗血癥大鼠體內(nèi)TNF-a、NO的水平，改善其循環(huán)功能，減低重要臟器的損傷，顯著提高敗血癥大

3、鼠1周的存活率。因此我們思考：由于轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子NF-κB調(diào)控著細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄和凋亡程序，rhGH 是否是通過改變NF-κB的活化程度來降低細(xì)胞因子的水平，是否對細(xì)胞的凋亡有保護(hù)作用? 研究目的:研究rhGH對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡和NF-κB的活化程度的影響，為敗血癥的治療開辟新的方法提供科學(xué)依據(jù)。 研究方法: 1、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度rhGH對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響，選擇rhGH的最佳濃度，

4、根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)選擇LPS的濃度，然后細(xì)胞分組：空白對照組、LPS組、rhGH+LPS組、rhGH組，每組設(shè)5個復(fù)孔。將細(xì)胞與藥物共同孵育16小時后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞的凋亡率。 2、同樣的細(xì)胞分組，加藥孵育16小時后，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測各組巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-κBP65核移位的情況，用NF-κB P65陽性表達(dá)的細(xì)胞率來代表NF-κB的活化程度。 研究結(jié)果： 1、rhGH對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響：根

5、據(jù)rhGH的量效實驗選擇rhGH的最佳濃度為4u/L，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)選擇LPS的濃度為40μg/ml，將細(xì)胞與藥物共同孵育16小時后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測空白對照組、LPS組、rhGH+LPS組、rhGH組的細(xì)胞凋亡率分別為3.70±0.66％、9.1±2.40％、4.13±0.57％、3.65±0.66％。rhGH+LPS組的細(xì)胞凋亡率明顯低于LPS組，P<0.01。 2、rhGH對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)NF-кB的活化程度的影響：空白對

6、照組、LPS組、rhGH+LPS組、rhGH組的NF-кB P65陽性表達(dá)的細(xì)胞率分別為1.67±0.20％、41.1±10.46％、9.3±1.9％、1.46±0.41％。LPS組的巨噬細(xì)胞內(nèi)的NFкB明顯活化，rbGH+LPS組的巨噬細(xì)胞內(nèi)的NF.K B的活化程度明顯下降(9.3±1.9％VS41.1±10.46％)，P<0.01。 結(jié)論： 1.rhGH抑制了LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的凋亡效應(yīng)。 2.rhGH可能是