含透明質(zhì)酸PADM與自體斷層皮復(fù)合移植對(duì)兔創(chuàng)面愈合質(zhì)量的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：將添加外源性透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)的異種(豬)去細(xì)胞真皮基質(zhì)(porcine acellular dermal matrix,PADM)與薄自體皮片復(fù)合移植于兔全層皮膚缺損創(chuàng)面,從復(fù)合移植皮片攣縮率及生物力學(xué)性能角度評(píng)價(jià)其對(duì)創(chuàng)面愈合質(zhì)量的影響。繼而從皮片血管化、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)、HA及受體變化探討其發(fā)生作用的機(jī)制。
　　 方法：⑴取日本大耳白兔20只,制作背部皮膚全層缺損創(chuàng)面模型,創(chuàng)面按處

2、理方式的不同隨機(jī)分為5組:HA1+PADM+薄自體皮組(HA1組)、HA2+PADM+薄自體皮組(HA2組)、PADM+薄自體皮組(PADM組)、薄自體皮移植組(TS組)、正常皮膚組(NS組),每個(gè)創(chuàng)面5cm×3cm大小。于術(shù)后28d、56d觀察創(chuàng)面愈合情況,計(jì)算皮片攣縮率；取移植區(qū)域組織標(biāo)本行病理學(xué)檢查,觀察膠原結(jié)構(gòu)以及移植物與周圍組織融合情況；采用 ZWICK萬能材料試驗(yàn)機(jī)檢測(cè)移植后皮膚組織的松弛、蠕變、應(yīng)力-應(yīng)變等生物力學(xué)指標(biāo),對(duì)

3、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。⑵取日本大耳白兔50只,制作背部皮膚全層缺損創(chuàng)面模型,創(chuàng)面按處理方式的不同隨機(jī)分為5組:HA1+PADM+薄自體皮組(SHA1組)、HA2+PADM+薄自體皮組(SHA2組)、PADM+薄自體皮組(SPADM組)、薄自體皮移植組(STS組)、正常皮膚組(SNS組),每個(gè)創(chuàng)面3cm×3cm大小。術(shù)后3d、7d、14d、28d、56d分別切取移植區(qū)域組織標(biāo)本,行HE染色觀察結(jié)構(gòu)變化；免疫組化檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31

4、,并計(jì)算微血管密度(microvesseldensity,MVD)；用免疫組化和Western blotting方法對(duì)復(fù)合植皮組織中Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)；ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD44的表達(dá)；放射性免疫方法檢測(cè)HA濃度,對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：①皮片攣縮率:術(shù)后28d,TS組攣縮率最大(p<0.05),PADM組、HA1組與HA2組之間無差異(p>0.05)；術(shù)后56d,PADM組與TS組攣縮率最大

5、(p<0.05),HA2組攣縮最小(p<0.05)。②生物力學(xué)：松弛曲線顯示,術(shù)后28d,HA2組與Ns組曲線最接近,HA1組與TS組最接近。術(shù)后56d,HA2組、HA1組與NS組曲線最接近,PADM組偏離NS組最大；蠕變曲線顯示,術(shù)后28d,PADM組與NS組曲線最接近,其次為TS組、HA2組,HA1組距離NS組曲線稍遠(yuǎn)。術(shù)后56d,實(shí)驗(yàn)各組與NS組曲線十分接近；應(yīng)力-應(yīng)變曲線顯示,術(shù)后28d和56d,HA2組與NS組最接近,在相同應(yīng)

6、變下的應(yīng)力最小的,皮膚柔韌性最好,但能承受的最大應(yīng)力較小,皮膚的強(qiáng)度差；PADM組偏離NS組最遠(yuǎn),較其它組彈性差,但能夠承受較大的應(yīng)力,強(qiáng)度最好；HA1組與TS組最接近。③MVD:術(shù)后3d,SHA1組與SHA2組未見毛細(xì)血管,STS組與SPADM組出現(xiàn)毛細(xì)血管(p<0.01)；術(shù)后7d,SHA1組和SHA2組出現(xiàn)毛細(xì)血管,SPADM組與SHA1組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),SHA2組MVD值高于SPADM組與SHA1組,STS

7、組又高于SHA2組(p<0.01)；術(shù)后14d,SPADM組與STS組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),SHA1組MVD值高于SPADM組與STS組,SHA2組又高于SHA1組(p<0.01)；移植后28d、56d,MVD值依次為SHA2組>SHA1組>STS組>SPADM組>SNS組(p<0.01).從3d至56d,各實(shí)驗(yàn)組的MVD值都經(jīng)歷了先上升后下降的過程(p<0.01)。④Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá):術(shù)后28d和56d,SHA1

8、組,SHA2組Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白含量較SPADM組高(p<0.05),其中SHA2組Ⅰ型、Ⅲ型膠原高于SHA1組(p<0.05)。⑤CD44含量:術(shù)后3d、7d,SHA1組、SHA2組和SPADM組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),SHA2組>SHA1組>SPADM組；術(shù)后14d,SHA1組和SHA2組之間無差異(p>0.05),SPADM組中CD44含量高于SHA1組和SHA2組(p<0.05):術(shù)后28d,SHA1組和SPADM

9、組之間無差異(p>0.05),SHA2組中CD44含量低于SHA1組和SPADM組(p<0.05)；術(shù)后56d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),二組均低于SHA2組(p<0.05)。⑥HA濃度:術(shù)后3d,SHA1組和SHA2組之間無差異(p>0.05),二組的HA濃度高于SPADM組(p<0.05)；術(shù)后7d,SHA1組、SHA2組和SPADM組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；術(shù)后14d,SHA1組和SHA2組

10、之間無差異(p>0.05),SPADM組的HA濃度高于SHA1組和SHA2組(p<0.05)；術(shù)后28d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),SHA2組的HA濃度低于SHA1組和SPADM組(p<0.05)；術(shù)后56d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),SHA2組的HA濃度高于SHA1組和SPADM組(p<0.05)。
　　 結(jié)論：外源性HA可減輕兔創(chuàng)面復(fù)合皮移植后的皮片攣縮,提高復(fù)合皮移植后創(chuàng)