通痹湯治療痛風病藥效學研究及其含藥血清的免疫調節(jié)作用.pdf

1、目的：以中醫(yī)理論為指導,總結痛風病的中醫(yī)認識、分析通痹湯的方義;觀察通痹湯對模型動物的抗炎、鎮(zhèn)痛及嘌呤代謝的影響并探討機理;觀察通痹湯含藥血清對巨噬細胞功能的影響;觀察含藥血清對體液免疫和細胞免疫功能的影響;觀察含藥血清對CD4+T細胞亞型(Th1/Th2)的影響。
　　 方法:
　　 1.通過理論研究,闡述痛風病的病因病機、探討其治則治法。
　　 2.通痹湯鎮(zhèn)痛作用的實驗研究。
　　 (1)觀察藥物對小

2、鼠化學性痛的影響:通過醋酸誘發(fā)小鼠腹痛,觀察各藥物劑量組與鹽酸嗎啡組、空白組的扭體次數(shù)、扭體抑制率;
　　 (2)觀察藥物對小鼠熱性痛的影響:通過熱板誘發(fā)小鼠熱性痛,觀察各藥物劑量組與鹽酸嗎啡組、空白組的痛閾值;
　　 3.通痹湯抗炎作用的實驗研究
　　 (1)觀察藥物對急性化學致炎癥的影響:通過二甲苯注射制備小鼠耳腫脹模型,比較各藥物劑量組與消炎痛組、空白組的腫脹抑制率;
　　 (2)觀察藥物對急性炎癥

3、介質的影響:通過角叉菜注射制備大鼠足跖腫脹模型,比較各藥物劑量組與醋酸地塞米松組、空白組的致炎后足跖腫脹率、組織滲出液炎性介質含量(Histamine、5-HT、PGE2);
　　 (3)觀察藥物對慢性炎癥的影響:通過皮下棉球植入制備大鼠慢性肉芽腫模型,比較各藥物劑量組與醋酸地塞米松組、空白組的肉芽腫重量;
　　 (4)觀察藥物對毛細血管通透性的影響:通過小鼠腹腔色素滲出實驗,觀察各藥物劑量組與PNS組、空白組腹腔液的O

4、D值。
　　 4.通痹湯影響嘌呤代謝的實驗研究。通過高核蛋白、高鈣飼料飼服制備雞痛風模型,以ELISA法檢測,比較各藥物劑量組與別嘌呤醇組、空白組血尿酸水平、糞便尿酸含量、血清黃嘌呤氧化酶(XOD)活性。
　　 5.通痹湯對急性痛風性關節(jié)炎作用的實驗研究。通過尿酸鈉溶液注射制備大鼠急性痛風性關節(jié)炎模型,比較各藥物劑量組與秋水仙堿組、空白組關節(jié)腫脹的影響、滑膜細胞因子表達。
　　 6.通痹湯含藥血清免疫調節(jié)作用研究

5、。
　　 (1)含藥血清對固有性免疫的作用。以大鼠腹腔巨噬細胞為研究對象,觀察藥物對其功能的影響:免疫酶技術檢測含藥血清對sTNF誘導的巨噬細胞呼吸爆發(fā)現(xiàn)象的影響;實時熒光定量PCR檢測含藥血清對sTNF誘導巨噬細胞炎性細胞因子IL-1β、TNF-α mRNA表達的影響;激光共聚焦顯微鏡檢測含藥血清對sTNF誘導巨噬細胞NF-κB(P65)核轉位的影響;小鼠碳粒廓清法檢測含藥血清對巨噬細胞吞噬功能的影響;
　　 (2)含

6、藥血清對適應性體液免疫功能的作用:美洲商陸誘導的B淋巴細胞增殖實驗、sRBC誘導的小鼠抗體應答實驗;
　　 (3)含藥血清對適應性細胞免疫功能的作用:刀豆蛋白A誘導的T淋巴細胞增殖實驗、DNCB-丙酮溶液誘導的遲發(fā)型超敏反應實驗;
　　 (4)含藥血清對CD4+T細胞亞型(Th1/Th2)的影響:通過ELISA法檢測不同時相關節(jié)滑膜囊細胞因子的種類和含量。
　　 結果：
　　 1.理論研究結果:脾虛不運、

7、濕濁為患是痛風病的重要病機。
　　 2.通痹湯鎮(zhèn)痛作用的實驗結果:
　　 急性毒性實驗確定用藥安全劑量為:小鼠用藥量:高劑量組25g/kg,中劑量組為12g,低劑量組為6g。大鼠用量約為小鼠劑量×0.7,即為高劑量組18g/kg、中劑量組為9g/kg、低劑量組為4g/kg;藥物對醋酸誘發(fā)小鼠腹痛的影響結果顯示治療組低、中、高劑量組均可見扭體次數(shù)減少,與陰性對照組比較具明顯差異(P＜0.001);熱板法檢測藥物對小鼠熱致疼

8、痛作用的影響結果顯示測得治療組痛閾平均值與陰性對照組相比顯著提高(P＜0.01);甲醛測痛實驗結果顯示通痹湯對甲醛致痛作用第一時相(即5min時)和第二時相(15min、30min)的疼痛反應評分值均出現(xiàn)降低。
　　 3.通痹湯抗炎作用的實驗結果:
　　 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗結果顯示各組與空白組比較均有顯著性差異(P＜0.01～0.001)且呈現(xiàn)劑量相關性;角叉菜所致大鼠足跖腫脹實驗結果顯示致炎后1h,藥物大劑量組;致

9、炎后2h藥物中、大劑量組;致炎后4h、6h藥物大、中、小劑量組抑制率均大于30％,其中大劑量組在4小時左右抑制能力最強為50.31%;炎癥組織滲出液內炎癥介質含量測定結果顯示治療組組織滲出液內組織胺含量顯著降低;藥物高劑量組前列腺素2、5-HT含量顯著降低(P＜0.05);小鼠腹腔色素滲出實驗結果示各給藥組均能降低依文思蘭的吸光度(OD值);大鼠棉球植入實驗結果顯示,通痹湯中高劑量組可明顯抑制大鼠肉芽組織增生(P＜0.001)。

10、　　 4.通痹湯影響嘌呤代謝的實驗結果:
　　 雞痛風癥動物模型血尿酸水平的影響結果顯示治療組血尿酸值均顯著降低,與治療前相比均有顯著性差異(P＜0.05),治療后通痹湯高、中、低劑量組糞便中尿酸排泄量均顯著增高,與治療前相比均具顯著性差異;對雞痛風動物模型血清XOD活性的影響實驗結果顯示,各劑量組XOD活性降低,其中中、高劑量組與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05)。低劑量組無顯著差異。
　　 5.通痹湯對急性痛風

11、性關節(jié)炎作用的實驗結果:
　　 藥物對大鼠尿酸鈉誘發(fā)急性炎關節(jié)腫脹的影響實驗結果顯示在注射后的2h、4h、8h、12h、24h檢測時段,藥物治療組腫脹率明顯減小,藥物組最高抑制率達68.6%(高劑量組,24小時)所用藥物兩劑量組之間的療效無顯著性差異。檢測滑膜炎性細胞因子mRNA表達結果顯示秋水仙堿組(陽性對照組)、治療組IL-1β RT-PCR產(chǎn)物量明顯低于生理鹽水組。而通過密度掃描進行相對定量,證實治療組的抑制效率為50%;

12、治療組Ⅰ和治療組Ⅱ均可見TNF-α特異性RT-PCR產(chǎn)物條帶顯示,但產(chǎn)物表達量較生理鹽水組明顯減少。通過密度掃描進行相對定量,證實治療組的抑制率為30%。
　　 6.通痹湯含藥血清免疫調節(jié)作用實驗結果:
　　 (1)含藥血清對固有性免疫的作用:
　　 結果顯示10%濃度含藥血清可明顯抑制sTNF誘導巨噬細胞的呼吸爆發(fā),而20%含藥血清的抑制作用最強;檢測含藥血清對sTNF誘導巨噬細胞表達IL-1βmRNA和TNF

13、-αmRNA的影響結果顯示治療組IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表達明顯降低;含藥血清能抑制sTNF誘導大鼠腹腔巨噬細胞NF-κB核轉位現(xiàn)象,但不同劑量含藥血清組間未見差異;單核吞噬細胞吞噬功能測定結果顯示含藥血清低劑量組和中藥水劑低劑量組K值變化與生理鹽水對照組比較沒有統(tǒng)計學意義,而含藥血清高劑量組和中藥水劑高劑量組K值增加(P＜0.05)。
　　 (2)含藥血清對適應性體液免疫功能的作用:
　　 淋巴細胞增殖實

14、驗結果顯示含藥血清對PWM誘導的B淋巴細胞增殖指數(shù)增高,提示有細胞增殖,但無統(tǒng)計學差異。(p＞0.05);測定含藥血清對小鼠sRBC初次應答的水平的影響,將給藥組與對照組平均HC50值進行t檢驗,結果顯示,藥物中、高劑量組HC50增高(*P＜0.05)。
　　 (3)含藥血清對適應性細胞免疫功能的作用:
　　 淋巴細胞增殖實驗結果可見不同濃度含藥血清可劑量依賴性抑制T細胞增殖(p＜0.05);含藥血清對DNCB誘導的遲發(fā)

15、性超敏反應具有顯著劑量依賴性的抑制作用。
　　 (4)含藥血清對CD4+T細胞類型(Th1/Th2)的影響:
　　 ELESA檢測不同時相細胞因子水平顯示與正常組比較TNF隨時間延長逐漸升高,在24h達高峰,此后逐漸下降。IL-2于造模12h始顯著增高,48h后開始下降;造模24h IL-4,IL-13顯著增高。與模型組比較,藥物組TNF、IL-2表達顯著降低,IL-4,IL-13顯著增高(P＜0.05)。