產(chǎn)α-糖苷酶抑制劑鏈霉菌株P(guān)W609的篩選及活性成分分析.pdf

1、α-糖苷酶抑制劑可以直接延緩人體腸道中淀粉的消化和吸收，從而降低餐后高血糖，是目前最安全有效的降糖藥物之一，研發(fā)療效好、副作用小且作用靶點(diǎn)明確的α-糖苷酶抑制劑類(lèi)藥物一直是口服降糖藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。鏈霉菌是種類(lèi)和數(shù)量龐大的一個(gè)微生物類(lèi)群，具有強(qiáng)大的生物合成能力，一直以來(lái)都是人們篩選新型天然化合物的資源寶庫(kù)。
　　本研究以參與淀粉降解的關(guān)鍵酶——重組人小腸麥芽糖苷酶C端催化亞基(CtMGAM)為靶標(biāo)蛋白，對(duì)71株鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行篩

2、選。通過(guò)測(cè)定半抑制濃度IC50的數(shù)值，來(lái)比較它們對(duì)CtMGAM的抑制作用，最終確定了IC50值最小的PW609菌株作為后續(xù)研究菌株。
　　根據(jù)對(duì)菌株P(guān)W609進(jìn)行的形態(tài)學(xué)特征和生理生化特征實(shí)驗(yàn)，以及16S rDNA序列和系統(tǒng)進(jìn)化分析，它的分類(lèi)地位被初步鑒定為鏈霉菌屬淀粉酶鏈霉菌（Streptomyces diastaticus），將其16S rDNA序列提交GenBank，登記號(hào)為GQ985448。
　　對(duì)PW609菌株進(jìn)行

3、10-L搖瓶發(fā)酵，發(fā)酵液通過(guò)中空纖維膜超濾、乙醇沉淀、離子交換和大孔吸附樹(shù)脂以及半制備液相，可以得到α-麥芽糖苷酶抑制劑混合物SE609-Ⅳ。在分離純化過(guò)程中，隨著雜質(zhì)的減少，其對(duì)應(yīng)的半抑制濃度也在減小，達(dá)到了分離純化的目的，最后獲得的SE609-Ⅳ回收率0.33％，IC50=0.001823mg/mL。
　　將SE609-Ⅳ與市售的3種α-糖苷酶抑制劑類(lèi)降糖藥物進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)其抑制作用比阿卡波糖弱5.20倍，但比同樣劑量的伏格列