腸道菌群紊亂與調(diào)整對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的影響.pdf

1、目的:
　　1.分析類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者腸道特異菌屬的菌群結(jié)構(gòu)，探討RA腸道特異菌屬多樣性變化和菌群特征，為篩選對RA有調(diào)整作用的益生菌候選菌株提供依據(jù)。
　　2.探討腸道菌群紊亂對大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展的影響。
　　3.探討羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri）、兩歧雙歧桿菌（Bifidobacteriumbifidum）的調(diào)整對大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展的影響及機(jī)制。
　　方法:

2、>　　1.根據(jù)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)篩選出RA患者，采取糞便標(biāo)本。
　　2.利用PCR-DGGE指紋圖譜技術(shù)分析RA組腸道特異菌屬多樣性的變化，利用切膠測序的方法分析特異性條帶種屬類別。
　　3.利用特異性引物PCR擴(kuò)增鑒定RA組和正常組特異性菌種。
　　4.利用Ⅱ型膠原蛋白和非完全弗氏佐劑兩次免疫的方法建立大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型。
　　5.利用抗生素頭孢曲松鈉灌胃的方法建立大鼠腸道菌群失衡模型。
　　6.利用羅伊氏乳

3、桿菌、兩歧雙歧桿菌灌胃的方法建立大鼠腸道菌群重建模型。
　　7.利用PCR-DGGE指紋圖譜技術(shù)分析各組大鼠各個階段腸道菌群變化。
　　8.利用關(guān)節(jié)腫脹評分，評估關(guān)節(jié)腫脹程度。
　　9.利用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法測定免疫指標(biāo)IgG、IL1-β、TNF-α、IL-6、IL-17、IL-4和IL-10的含量。
　　10.利用比色法測定SOD活力和MDA含量。
　　結(jié)果:
　　RA患者腸道特異菌屬變

4、化分析
　　1.與正常組相比，RA組中的乳桿菌屬多樣性明顯降低(p＜0.01)，測序與PCR鑒定顯示RA組羅伊氏乳桿菌(p＜0.01)和唾液乳桿菌(p＜0.05)明顯降低，融合魏斯氏菌明顯增多(p＜0.05)，惰性乳桿菌有增多趨勢。
　　2.與正常組相比，RA組中的類桿菌屬多樣性明顯降低(p＜0.01)。切膠測序結(jié)果顯示，正常組較多的菌種為糞便擬桿菌（Bacteroides stercoris）;RA組較多的菌種為多形擬桿菌

5、（Bacteroides thetaiotaomicron）。
　　3.與正常組相比，RA組中的普雷沃菌屬多樣性明顯降低(p＜0.01)。
　　腸道菌群紊亂和成模前調(diào)整對大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的影響及機(jī)制研究
　　1.與對照組相比，抗生素組腸道菌群多樣性降低(p＜0.01)。
　　2.與對照組相比，模型組條帶數(shù)有所減少，菌群調(diào)節(jié)后有升高趨勢;與模型組相比，抗生素處理結(jié)束42天后的模型組條帶數(shù)無明顯差異，菌群調(diào)整后條帶數(shù)

6、有所增加。
　　3.與對照組相比，模型組關(guān)節(jié)腫脹評分和血清中IgG含量明顯升高(p＜0.01)，羅伊氏乳桿菌調(diào)整后關(guān)節(jié)腫脹評分明顯降低(p＜0.05)，IgG有降低趨勢，菌群調(diào)整后略有降低。
　　4.與對照組相比，模型組血清中IL1-β、TNF-α、IL-17(p＜0.01)和IL-6(p＜0.05)含量明顯升高，IL-4和IL-10的含量明顯降低(p＜0.01)，羅伊氏乳桿菌調(diào)整后IL1-β、TNF-α和IL-17明顯降低

7、(p＜0.01)，IL-6略有降低，IL-4含量明顯回升(p＜0.01)，IL-10略有升高，兩歧雙歧桿菌調(diào)整后IL1-β和TNF-α明顯降低(p＜0.01)，IL-6和IL-17有降低趨勢;IL-4含量明顯回升(p＜0.05)，IL-10略有升高。
　　5.與模型組相比，羅伊氏乳桿菌調(diào)整組血清和滑膜液中SOD活力略有升高，血清中MDA含量明顯降低(p＜0.05)，兩歧雙歧桿菌調(diào)整組血清中的SOD活力略有升高，滑膜液中的SOD活力

8、明顯升高(p＜0.05)，血清中MDA含量降低。
　　6.以上所有指標(biāo)，與模型組相比，抗生素處理后模型組除了IL1-β(p＜0.01)其余指標(biāo)均無明顯差異。
　　腸道菌群紊亂及成模后調(diào)整對大鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的影響及機(jī)制研究
　　1.與對照組相比，模型組條帶數(shù)有所減少，菌群調(diào)節(jié)后有恢復(fù)趨勢;與模型組相比，抗生素處理結(jié)束42天后的模型組條帶數(shù)無明顯差異，菌群調(diào)整后條帶數(shù)有所增加。
　　2.與對照組相比，模型組關(guān)節(jié)腫脹評

9、分和血清中IgG含量明顯升高(p＜0.01)，羅伊氏乳桿菌和兩歧雙歧桿菌調(diào)整后腫脹評分有降低趨勢，IgG明顯降低(p＜0.01，p＜0.05)。
　　3.與對照組相比，模型組血清中IL1-β、IL-6、IL-17(p＜0.01)和TNF-α(p＜0.05)的含量明顯升高，IL-4和IL-10的含量明顯降低(p＜0.01)，羅伊氏乳桿菌調(diào)整后IL1-β、IL-6、IL-17(p＜0.01)和TNF-α(p＜0.05)明顯降低，IL-

10、4略有升高，IL-10含量明顯回升(p＜0.05)，兩歧雙歧桿菌調(diào)整后IL1-β、IL-6、IL-17(p＜0.01)和TNF-α(p＜0.05)明顯降低，IL-4和IL-10略有升高。
　　4.與模型組相比，羅伊氏乳桿菌調(diào)整組血清和滑膜液中的SOD活力略有升高，血清中MDA含量明顯降低(p＜0.01)，兩歧雙歧桿菌調(diào)整后血清中SOD活力明顯升高(p＜0.01)，滑膜液中的SOD活力略有升高(p＜0.05)，血清中MDA含量明顯降

11、低(p＜0.05)。
　　5.以下所有指標(biāo)，與模型組相比，抗生素處理后模型組的結(jié)果均無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.RA患者中乳桿菌屬、類桿菌屬和普雷沃菌屬多樣性明顯降低。
　　2.成年期大鼠—過性菌群紊亂對RA發(fā)生發(fā)展影響不明顯。
　　3.建模前給予羅伊氏乳桿菌、兩歧雙歧桿菌能夠減輕RA腫脹程度，延緩RA發(fā)生發(fā)展，此作用可能通過減緩炎癥和降低氧化壓力起效。
　　4.建模后給予羅伊氏乳桿菌、兩歧雙歧